雏鸡大肠杆菌的实验室诊断

柳 明?

（黑龙江省绥化市北林区动物检疫站 152000）

1 材料与方法?

1.1 材料?

1.1.1 病料来源?

病料来源为绥化市某县市中随机选出的三个鸡场中疑似大肠杆菌感染的 7日龄鸡群中分别各取出 10只进行临床诊断和实验室诊断。?

1.1.2 培养基和试剂?

主要培养基和试剂有麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、革兰染液，普通肉汤培养基、普通琼脂培养基、三糖铁琼脂、药敏片、葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、蔗糖、枸橼酸盐及各类生化反应试剂、大肠埃希菌O型抗血清。?

1.1.3 仪器?

主要仪器有显微镜、试管、培养皿、吸管等。?

1.2 进行雏鸡大肠杆菌实验的方法?

分别对三个鸡舍的鸡群总数、发病数和死亡数作出统计。无菌采集病死鸡的心、肝、脾、肺、肾等组织，将病料触片和血液涂片，分别进行革兰染色和碱性美蓝染色、镜检。对A、B、C三个样病例进行细菌分离培养和血清型鉴定。从三个样中随机挑取两个总共组成6个 （a、b、c、d、e、f）紫黑色带有金属光泽的菌落接种到斜面培养基上，37℃恒温培养18~24h。观察细菌生长及菌落特征。?

1.2.1 动物回归试验?

将分离纯培养的 6个病原菌菌液颈部皮下接种 30 只 7 日龄雏鸡，每只 0.2mL（约2×108cfu）。并设10只为对照组，每只颈部皮下注射0.2mL灭菌肉汤。隔离饲养，观察1 星期。?

1.2.2 药敏试验?

将斜面培养基中增菌纯培养的菌株培养液均匀涂布于普通琼脂培养基表面，37℃干燥8min。然后用灭菌镊子取 10种抗生素药物纸片，将其分别对称地贴在培养基表面，每个平皿贴4种，37℃恒温培养18~20h后观察结果。使用的 10种药物为呋喃妥因、复方新诺明、庆大霉素、链霉素、青霉素、丙氟哌酸、头孢他啶、利福平、磺胺嘧啶、新生霉素。还做了平板凝集试验和生化试验。?

2 结果与分析?

2.1 镜检、血清型鉴定和生化试验结果?

病料涂片染色与病料接种培养后染色镜检，均检测到革兰阴性短杆菌。选择攻毒试验中对鸡呈现高致病力的菌株 a、b、c、d、e与禽大肠杆菌 O型单因子血清分别进行平板凝集试验，三个样A、B、C的血清型鉴定鉴定结果都包含O1、O2、O78。A、B、C三个群体总共30只病例中，有 16只分离株是可以定型的，其中以 O1、O2、O78为主，这三种血清型在种类上占总量的 53.3%（16/30）因此，可以认为 O78、O1、O2 可能是绥化地区的优势血清型。对分离的病原菌进行生化试验，均能分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇及蔗糖，产酸产气，初步判断为大肠杆菌。?

2.2 动物回归试验结果及分析?

采用相同菌株攻毒，鸡只死亡数量具体见表1。?

通过用6组菌株分别给6组鸡攻毒结果来看，有4组都是阳性，其病理变化原发病鸡基本一致。无菌采集病死鸡脏器进行细菌学检测，结果分离到与送检病例一致的大肠埃希菌。?

2.3 药敏试验?

选取药物进行药物敏感性试验，结果见表2。?