猪只抗体水平的有效采样与检测方法

李佳鹏?

（黑龙江省桦川县兽医卫生防疫站154300）

最近几年，我国猪只的饲养模式大多都是规模化、集约化，尽量在有限的空间内，采用工厂化的饲养方式尽可能多的饲养猪只，从而得到较大的收益。据报道，经过高度选育的猪群，对疾病特异和非特异抵抗的免疫记忆逐代降低，饲养空间小，而饲养密度又比较大，都会降低猪群的抵抗力，如果传染病暴发流行在猪群中，会给饲养者带来较大的经济损失。?

1被采样猪只?

饲养场中的采样主要对象是公猪和后备母猪，尤其是种公猪，而后备母猪是饲养场的源头，公猪和后备母猪的抗体水平基本上能够反映出本场的整个抗体水平。对妊娠猪、哺乳猪、断奶母猪和仔猪也进行采样，对猪只生长流程中的各阶段加以监控。?

2采样数量?

采样有一定的数量才具有统计学意义，如果采样品的数量低，根本不能够代表整个养猪场的抗体水平，但是如果采样样品的数量太多，又不经济。按照一般统计学的规律，如果猪群的采样量为20头时，具有98%的可信度；采样量为30头时，就能达到99%的可信度；当采样量达到40头时，就具有了99.5%的可信度；若猪群的采样量为50头，那么可信度就能达到99.9%。所以，建议分别对每个阶段采样30头以上，几乎就可以代表猪场的整体水平。?

3采样方法?

采样时要选择健康的猪只，不对病猪进行采样，确保是随机进行采样，保证每个胎次都能达到均衡状态。采血时要尽量避免污染，用酒精棉擦拭采血部位进行消毒，采血量要多于2mL，这样能够保证供检测的血清足够量。清楚标记采集的样品、编号要具有规律性，有顺序的给样品进行排列，以便于检测和对结果进行统计。采集的样品要装在保温盒中，并且保温盒里应该有冰袋，及时的送到实验室，在运送途中尽量不要摇晃保温盒，避免出现溶血现象。采集的样品应该标记号详细的说明，具体数据应该包括猪只的日龄、胎龄、猪群种类以及健康状况，还有最后的免疫时间和疫苗来源等。?

4检测?

猪瘟血清抗体水平的检测采用正向血凝试验。在96孔血凝板上，每孔加入50μL稀释液，每排第一孔加入待检血清50μL，递比稀释待检血清至血清浓度为1∶512，最后50μL丢弃。再在每孔加入抗原诊断液25μL，置湿盒中于25℃孵育1.5~3.0h，判定结果。判定标准：凡能使50%的红细胞凝集的血清最大稀释倍数为该份血清的抗体效价，猪瘟血清抗体效价高于或等于1∶16视为免疫合格。猪伪狂犬病、猪蓝耳病抗体检测参照美国IDEXX公司ELISA诊断试剂盒说明书进行。待检血清分别作?1∶?20(猪伪狂犬病抗体检测)和1∶40(猪蓝耳病抗体检测)稀释。取稀释好的待检血清100μL加入包被好的96孔聚苯乙烯诊断试剂盒中，置湿盒内25℃作用30min，取出，用洗涤液充分洗涤3~5次，甩尽残留液体，每孔加入酶标抗体100μL，置湿盒内?2.5℃?作用30min，洗涤。再在每孔中加入TMB底物溶液100μL，置湿盒内25℃；作用15min后，加入终止液100μL，立即置B10?RAD550型酶标仪上650nm处测定。分别按所附计算公式判定是否为血清抗体阳性。?

5讨论?

从整体水平出发，以猪瘟抗体间接血凝价在?1∶?16以上时能抵抗强毒感染作为参考，仅有很少的猪场和猪群达不到这个水平。也有部分猪场中的少数猪只，猪瘟抗体滴度低，不能抵抗强毒侵袭而发病，或者是成为隐性带毒猪，对易感猪群造成威胁。导致这种结果的原因，可能与猪瘟疫苗免疫程序不合理和免疫质量不佳有关。清除小群范围内的疾病感染，可以使用基因工程致弱活毒苗，以及相容的血清学试验区分疫苗抗体和野毒感染诱导产生的抗体。?

抗体水平的形成会因为接种疫苗引起，也可能是因为自然感染的野毒引起，目前对于抗体水平形成的具体原因还没有确定，也不容易区分。有的疫苗是靠细胞免疫发挥作用的而不是依靠抗体水平，比如伪狂犬病，所以用抗体水平评价伪狂犬疫苗是无任何作用的。不同生长阶段的猪群，其抗体水平也不相同，在产房仔猪具有较高的母源抗体水平，但是进入到保育舍以后，所有病原或者是疫苗的抗体水平都处于最低水平，到肥育阶段抗体水平会逐渐上升，发育为母猪的时候，抗体水平达到最高状态。