鸡白痢平板凝集试验方法

印宝东?

（辽宁省盘锦市动物疫病预防控制中心 124010）

鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的雏鸡最常见的、危害性很大的传染病，也称雏白痢。本病主要通过消化道感染。病鸡的排泄物污染了饲料、饮水和用具等均可传播，患病母鸡可通过种蛋将病菌传给后代。公鸡的睾丸也能带菌，通过交配可把病菌传给后代。各种年龄的鸡都能感染鸡白痢。雏鸡在出壳后第三天就能致病，7日龄左右死亡率最高。?

1 实验原理?

在有电解质存在的条件下，细菌等颗粒性抗原和特异性抗体相互结合，出现肉眼可见的凝集颗粒（块），称为凝集反应。根据颗粒的大小与出现的快慢判定试验反应结果。参与反应的抗原与抗体分别称为凝集原和凝集素。平板凝集试验具有由于简易、快速、敏感、特异的特点，长期以来广泛用于人畜多种传染病的快速诊断，在家禽最常用的是鸡白痢鸡与败血支原体感染的检验。?

2 实验仪器、设备及材料?

鸡白痢抗原是用鸡白痢沙门氏杆菌培养物加入0.3%的甲醛溶液灭活后，制成每毫升含菌100亿的悬浮液，并加入抗凝剂和色素制成，由兽医生物制品厂提供。鸡白痢标准阳性血清由兽医生物制品厂提供。被检血清或全血采自被检鸡群。实验仪器有洁净玻璃板、微量移液器或滴管、采血针头、不锈钢丝环、混合棒及被检鸡若干只。?

3 实验步骤?

操作程序。取一洁净玻片，用蜡笔划成若干方格，并编号，将抗原充分振荡混匀，用移液器或滴管吸取鸡白痢抗原，垂直滴1滴（约0．05mL）于平板各格上，在第一格抗原上滴上鸡白痢标准阳性血清1滴，在第二格抗原上滴上阴性血清1滴。其余各格为样品检测格（每只鸡一格），用针头刺破被检鸡的翅静脉或鸡冠，用不锈钢丝环沾取血液一环或用移液器吸取血液0.05mL滴加在抗原滴上，用灭菌牙签迅速将被检鸡全血与抗原混匀并散开至直径约为2cm的薄层后，轻轻晃动玻板，观测5min，判定结果并记录。?

结果判定标准。在阳性对照出现100%凝集和阴性对照液体均匀混浊无凝集现象的前提下，抗原与血液或血清混和后，于1min内出现很多大块的凝集颗粒且底液清亮者为强阳性反应，记录为“#”；1～3min内出现很多大小不等的凝集颗粒且底液略有混浊者为中强度阳性反应，记录为“++～+++”；3～4min后，出现少量细微颗粒，底液较混浊者为弱阳性反应，记录为“+”；未见凝集现象发生或在4min以后出现不明显的凝集现象者为阴性反应，记录为“-”。?

4 实验注意事项?

鸡白痢平板凝集试验的应用。鸡白痢是流行普遍、危害严重的家禽传染病，其传播的重要途径之一是经卵垂直传播。因此，在种鸡群中做好该病的控制和净化工作是防制本病的重要手段。鸡白痢平板凝集试验以简便、快捷、特异、敏感等特点在国内外普遍用于该病的临床检验，监视该病的控制与净化效果，指导控制与净化措施的修订与实施。?

对一般性商品生产种鸡群作鸡白痢检疫时应注意以下问题，检测样品抽检比例一般为1%～2%。检测出的阳性鸡只可淘汰也可不淘汰。检测的时间间隔对后备鸡群，首次检验应在40~70日龄，第二次检测在全面开产后每年检测2～3次。检测工作一定要配合有效的防疫工作，检测后对结果作统计，计算感染的阳性率并与上次检验结果比较，以便评估上次检测后相应防疫措施的效果，以便修订防疫计划，直至鸡群感染率下降至最低水平。?

对以建立净化鸡白痢为目的的SPF鸡群作检疫时应注意以下问题：检测样品的比例应为100%。检测出的阳性鸡只应予淘汰。检测时间间隔应为每月1次，或根据具体净化计划确定间隔时间。对阴性鸡群实施特别严格的隔离、卫生消毒措施和药物防制措施。鸡群完全净化的基本标准是以最后连续三次检测全为阴性，且鸡群在该段时间未用过对相应疾病敏感的药物。?

鸡白痢抗原应保存于8~10℃，避光、干燥处，使用过程中应不断摇匀。鸡白痢抗原适用于检查产蛋母鸡及一年以上的公鸡，对幼龄鸡的敏感性较差。平板凝集反应应在20℃以上的室温下进行。使用蓝紫色鸡白痢抗原作试验，最好衬以白色背景以便于观察。本试验还可以以被检鸡卵黄液作被检材料，判断标准同上。