核酸探针在畜禽疾病诊断中的应用

邵云龙1，张万山2

（1．黑龙江省龙江县广厚乡畜牧兽医综合服务站 161122；2．黑龙江省杜蒙县大山种羊场166269）

摘要：随着社会经济水平的上升，生物科学技术也不断发展进步，在各个领域当中的应用越来越广泛。在畜禽的疾病诊断过程中，使用生物技术制备的核酸探针也越来越多，核酸探针具有非常多的优势，帮助畜禽疾病的诊断工作更加精确、可靠。本文主要分析核酸探针的诊断特点及其实际应用。

教育期刊网 http://www.jyqkw.com
关键词 ：核酸探针；畜禽；疾病诊断；实际应用

当前，生物医学技术不断发展进步，在畜禽疾病诊断领域当中得到非常广泛的应用，使畜禽疾病的诊断方式发生巨大转变。使用生物核酸探针技术对畜禽疾病进行诊断，具有特异性强、敏感度高以及简单快捷的优点，同时还能够避免由于培养困难或者是混合污染的现象，能够快速直接的对畜禽的体液、分泌物等进行检测，不仅为相关工作人员的工作提供方便，同时对于畜禽疾病早期诊断与控制具有非常重要的意义，帮助兽医选择最佳的方式进行治疗，杜绝大面积传染病的发生。

1 核酸探针在畜禽疾病诊断中的特点

1.1 特异性强

使用核酸探针进行检测是基于病原微生物的核酸碱基配对原理，通过核酸序列与标本中的另外的核酸发生互补以及结合，所以不会发生杂交的现象，更不会出现假阳性或者是假阴性，所以其特异性非常强，不会发生交叉反应和其他干扰现象。

1.2 灵敏性强

相较于传统的放射免疫等方式，DNA或者是RNA探针具有更强的灵敏度，能够检测出10～12g的抗原含量，在很早以前，美国基因探针公司生产的军团菌探针就已经能够在0. 4mg的肝脏组织中检测出4000个以上的细菌。有学者使用通过生物素标记的流产布氏杆菌全基因组的DNA探针能够在质量为lg的大鼠肝混合物当中检测出10（5）个细菌，同时还能够检测出通过试验接种的小鼠质量为1g的组织中存在的10（7）个布氏杆菌。

1.3 检测速度快

使用常规的方式需要经过病原分离、培养等方式耗费大量的时间才能够得出检测结果，但是使用核酸探针可以在45分钟之内就能够得到结果。有学者使用探针进行斑点免疫印迹杂交测试，在感染初期，家禽体内开始血清学应答前能够检出体内的败血霉形体，采样之后最多4天就能够得到试验结果，如果使用培养的方式则需要更长的时间。

1.4 方法简单

核酸探针检测能够对畜禽活体、死体甚至是体液和分泌物等进行检测，不需要进行体外扩增培养，更不需要使用其他设备辅助观察，流程非常简单。2核酸探针在畜禽疾病诊断中的实际应用

2.1 鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)的检测

早前有学者使用生物素对合成寡合苷酸探针进行标记，将鸡法氏囊组织在硝酸纤维膜上进行印记，然后与被生物素标记的探针进行杂交，随后对人工方式感染鸡的机体进行检测，取得非常满意的效果。之后又有学者使用26CI探针进行斑点杂交，对血清1型和2型的不同IBDV实施检测，结果显示探针没有与病毒发生交叉反应。且该探针检测病毒与核酸的最小量可以达到Img，同时能够检测出注射疫苗2～3天之后鸡体内法氏囊病毒以及组织当中存在的IBDV。

2.2 鸡马立克氏病毒的检测

我国生物研究者使用光敏的生物素对特定基因文库中的L片断进行标记，制备出鸡马立克氏病毒的光敏核酸探针，然后对培养物当中的病毒实施检测，发现探针对病毒中的血清1型马立克氏病毒中的DNA分子发生杂交，而2型和3型都不发生杂交反应。然后使用血清1型和血清2型对雏鸡进行接种，在第14天及30天使用斑点杂交法实施病毒DNA的检测，结果血清1型的结果呈现阳性，而血清2型的结果呈现阴性，证明制备的核酸探针能够对鸡马立克氏病毒的强毒株进行诊断。

2.3 鸡减蛋综合症病毒的检测

研究在使用制备的光敏性生物素探针对鸡减蛋综合症病毒感染的鸭胚尿囊液提取物实时监测，结果能够证实该探针对于鸡减蛋综合症病毒具有很强的特异性，同时能够检测到至少1pg的鸡减蛋综合症病毒DNA;但是在正常的鸭胚尿囊液的提取物不会与无质粒的受体菌DNA发生杂交反应。

2.4 鸡新城疫病毒的检测

国外的相关研究人员使用人工合成的寡合核苷酸DVA制备的探针进行实验，对环境及其他条件非常严格，然后试试狭缝印迹杂交实验，结果显示该探针能够识别出被检出的15个NDV。该探针的序列来源于鸡新城疫病毒基因组高度保守区域，具有非常强的特异性。