常用杀虫中药杀虫效果比较及其配伍的初步研究
2022-06-08
近年来从植物中寻找杀虫活性物质是目前研究开发无公害农药的重要途径之一[1]。中草药不仅具有医疗保健作用，而且还具有杀虫的作用[2]。我国自20世纪30年代开始，曾对烟草、鱼藤、巴豆、百部等杀虫植物进行过比较广泛的研究[3]。进入20世纪90年代，对有杀虫活性的植物资源又作了进一步的调查研究。对单味药的研究较多，尤其是对其有效成分的研究[4]。王氏等[5]分别对苍耳子用不同溶剂提取，发现不同溶剂提取物对菜粉蝶的作用各不相同。胡氏等[6]采用活体及盆栽试验研究水煎液提取的苦楝皮活性成分对蛴螬、金针虫杀虫效果，显示苦楝皮水煮液对地下害虫有杀灭作用。本实验选取10种中药，采用乙醇回流提取和水提取2种方法，选用标准试虫在实验条件下进行严格的生物测定，测定这些中药的杀虫作用，为研制新的植物源农药奠定基础。
1 材料与方法
1.1 供试昆虫
黏虫Mythimna separate引自甘肃省农业科学院敏感体系，室内自然条件下饲养，实验时挑选整齐一致的幼虫供试。甘蓝蚜Brevicoryne brassicae和朱砂叶螨Teranychus cinnbarinus均采自甘肃省农业科学院应用昆虫研究温室。
1.2 供试中药
百部、苍耳子、苦参、丁香、甘遂、瑞香狼毒、藜芦、苦皮藤、苦楝皮、雷公藤，甘肃中医药大学附属医院中药房。
1.3 主要试剂与仪器
无水乙醇，分析纯，天津市得思化学试剂有限公司。DHP-9272型电热恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司），QE-10A型高速粉碎机（武义科技有限公司），R-210型旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司）。
1.4 中药活性部位提取
将上述中药在小型粉碎机上粉碎，过10目筛制成粗粉，每味中药分别称取40 g放入圆底烧瓶，分别用纯水和80%乙醇电热套加热提取2次，第1次加8倍量溶剂，第2次加6倍量溶剂，每次提取时间为1 h；提取完毕后，抽滤，将2次滤液合并，旋转蒸发仪减压浓缩，最后得到较浓油状或浆状的原粉粗体物，经体积测量，浓缩液1 mL相当于1 g原药材，即浓度为1 g/mL。供生物测定试验使用。
1.5 生物测定方法
1.5.1 载玻片浸渍法 参照联合国粮食及农业组织推荐的测定螨类抗药性的标准方法——载玻片浸渍法[7]加以改进。粘在玻片双面胶带上的供试螨在温度（26±1）℃、湿度60%～80%的室内环境下放置4 h，然后用双目解剖镜检查，剔除死亡和不活泼的个体，记载总的活螨数，将带螨的一端浸入事先配好的药液中，6 s后取出，迅速用剪好的三角滤纸将周围多余的水吸干，温度（26±1）℃、湿度60%～80%，光照明暗交替16 h/8 h培养48 h，每24 h检查1次。用毛笔轻触其身体，以螨足不动者为死亡。每个浓度5个处理。实验重复3次。
1.5.2 微量点滴法 参照文献[8]微量点滴法并加以改进。在培养皿中垫入滤纸，保湿，剪取新鲜油菜叶放入培养皿中。将每味中药提取液分别稀释5个不同系列浓度，由低浓度开始给甘蓝蚜给药，用虹吸管取1 μL点滴在甘蓝蚜背部，分别在24 h和48 h进行观察，用毛笔轻触虫体，不动者视为死亡。实验重复3次。
1.5.3 虫体浸渍法 在培养皿中垫入滤纸，保湿，剪取新鲜小麦叶子放入培养皿中。将提取液稀释为5个不同系列浓度，倒入小烧杯中，挑取同日龄同样大小黏虫10只（每个浓度各10只），将其虫体浸渍在药液中10 s，将其表面液体用滤纸吸干，然后用镊子轻轻夹起，放入培养皿中，将培养皿放入25 ℃恒温培养箱中，24 h和48 h检查死亡情况，用毛笔轻触身体，不动者和不能爬行者视为死亡。实验重复3次。
1.6 统计学方法
采用Excel2003和spss13.0统计软件进行分析，以校正死亡率来表示实验结果。
2 结果
2.1 载玻片浸渍法对朱砂叶螨的触杀作用
中药醇提物作用优于中药水提物，中药水提物几乎无作用，见表1。苦皮藤、苦参、苍耳子、甘遂、百部醇提物分别对朱砂叶螨具有很强的触杀作用，毒力较强。从校正死亡率分析，在相同浓度下，苦皮藤、苦参、苍耳子、甘遂、百部对朱砂叶螨触杀作用较其他5味药强。当这5味药醇提物按照一定比例配伍后，单味药稀释100倍，其校正死亡率明显高于单味药醇提物，见表2。
2.2 微量点滴法对甘蓝蚜的触杀作用
醇提物作用明显优于水提物，瑞香狼毒、百部、藜芦、苍耳子乙醇提取物对甘蓝蚜有较强的杀灭作用，见表3。从校正死亡率分析，瑞香狼毒、百部、藜芦、苍耳子醇提物在相同的浓度下校正死亡率明显高于其他几味药和中药水提物，将这4味药醇提物按照一定比例配伍后，复合物校正死亡率明显高于单味药，见表4。
2.3 采用虫体浸渍法对黏虫的触杀作用
10味中药水和醇提物对黏虫的触杀实验中，只有百部醇提物对黏虫具有触杀作用，且毒力较强，其他几味中药水和醇提物均无作用。5次重复实验后其校正死亡率为96.7%。
3 讨论
采用10种中药提取物，以载玻片浸渍法、微量点滴法、虫体浸渍法分别实验。结果表明，中药水提物对害虫无抑制作用和触杀作用；但醇提物作用较好，百部对黏虫、蚜虫、朱砂叶螨均有触杀作用，苦皮藤、苦参、苍耳子、甘遂醇提物对朱砂叶螨触杀作用较好，瑞香狼毒、百部、藜芦、苍耳子对甘蓝蚜触杀作用较好；经混配后其触杀作用增强。
10种常用杀虫中药分别来自不同的科，其不但在治疗疾病的时候有很好的疗效，而且由于它们的偏性，对植物虫害也有防治作用。其中，瑞香狼毒、藜芦、甘遂、雷公藤、苍耳子均为有毒性的中药，以其毒性来防治病虫害早有研究，其单味药及从中分离出来的化学成分对害虫有触杀作用。有研究显示，藜芦碱、苦参碱、鱼藤酮和烟碱苦参碱对害虫具有较强的胃毒和触杀作用[7-8]，但中药混配作用触杀害虫的实验报道目前较少。本实验经过单味药筛选后，经中药混配研究，发现中药混配其药效明显强于单味药，其药效学机理及有效成分有待进一步研究。
另外，本实验仅为室内毒力测定，未涉及田间药效，为准确评价所试药剂对害虫的毒杀作用，今后应对田间防效试验做进一步研究。
参考文献：
[1] 贝纳新，高萍，石承民，等.植物源杀虫剂研究进展[J].沈阳农业大学学报，2002，33（4）：309-314.
[2] 张丽艳，赵茜，吴建忠.中药配伍的原理及其在杀虫植物配伍中的应用[J].安徽农业科学，2013，41（11）：4832-4833.
[3] 郝乃斌，戈巧英.中国植物源杀虫剂的研制与应用[J].植物学通报， 1999，16（5）：495-503.
[4] 慈颖，马爱敏，张顺合.植物源杀虫剂有效成分提取技术的研究进展[J].中华卫生杀虫药械，2009，15（2）：166-168.
[5] 王国夫，钟俊燕，胡春霞.苍耳有效成分的提取及其杀虫活性的研究[J].植物保护，2010（3）：155-157.
[6] 胡江川，孙爱芹，路明花.苦楝皮活性成分对几种地下害虫的杀虫效果研究[J].北方园艺，2012（7）：147-149.
[7] 徐河山，马雅军.植物源杀虫剂作用方式和机理的研究进展[J].热带医学杂志，2006，6（6）：743-746.
[8] 和玉华，杨婧，谢雯颖，和润喜.微量点滴法测定植物提取物对绣线菊蚜的触杀作用[J].北方园艺，2010（4）：167-169.
1 材料与方法
1.1 供试昆虫
黏虫Mythimna separate引自甘肃省农业科学院敏感体系，室内自然条件下饲养，实验时挑选整齐一致的幼虫供试。甘蓝蚜Brevicoryne brassicae和朱砂叶螨Teranychus cinnbarinus均采自甘肃省农业科学院应用昆虫研究温室。
1.2 供试中药
百部、苍耳子、苦参、丁香、甘遂、瑞香狼毒、藜芦、苦皮藤、苦楝皮、雷公藤，甘肃中医药大学附属医院中药房。
1.3 主要试剂与仪器
无水乙醇，分析纯，天津市得思化学试剂有限公司。DHP-9272型电热恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司），QE-10A型高速粉碎机（武义科技有限公司），R-210型旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司）。
1.4 中药活性部位提取
将上述中药在小型粉碎机上粉碎，过10目筛制成粗粉，每味中药分别称取40 g放入圆底烧瓶，分别用纯水和80%乙醇电热套加热提取2次，第1次加8倍量溶剂，第2次加6倍量溶剂，每次提取时间为1 h；提取完毕后，抽滤，将2次滤液合并，旋转蒸发仪减压浓缩，最后得到较浓油状或浆状的原粉粗体物，经体积测量，浓缩液1 mL相当于1 g原药材，即浓度为1 g/mL。供生物测定试验使用。
1.5 生物测定方法
1.5.1 载玻片浸渍法 参照联合国粮食及农业组织推荐的测定螨类抗药性的标准方法——载玻片浸渍法[7]加以改进。粘在玻片双面胶带上的供试螨在温度（26±1）℃、湿度60%～80%的室内环境下放置4 h，然后用双目解剖镜检查，剔除死亡和不活泼的个体，记载总的活螨数，将带螨的一端浸入事先配好的药液中，6 s后取出，迅速用剪好的三角滤纸将周围多余的水吸干，温度（26±1）℃、湿度60%～80%，光照明暗交替16 h/8 h培养48 h，每24 h检查1次。用毛笔轻触其身体，以螨足不动者为死亡。每个浓度5个处理。实验重复3次。
1.5.2 微量点滴法 参照文献[8]微量点滴法并加以改进。在培养皿中垫入滤纸，保湿，剪取新鲜油菜叶放入培养皿中。将每味中药提取液分别稀释5个不同系列浓度，由低浓度开始给甘蓝蚜给药，用虹吸管取1 μL点滴在甘蓝蚜背部，分别在24 h和48 h进行观察，用毛笔轻触虫体，不动者视为死亡。实验重复3次。
1.5.3 虫体浸渍法 在培养皿中垫入滤纸，保湿，剪取新鲜小麦叶子放入培养皿中。将提取液稀释为5个不同系列浓度，倒入小烧杯中，挑取同日龄同样大小黏虫10只（每个浓度各10只），将其虫体浸渍在药液中10 s，将其表面液体用滤纸吸干，然后用镊子轻轻夹起，放入培养皿中，将培养皿放入25 ℃恒温培养箱中，24 h和48 h检查死亡情况，用毛笔轻触身体，不动者和不能爬行者视为死亡。实验重复3次。
1.6 统计学方法
采用Excel2003和spss13.0统计软件进行分析，以校正死亡率来表示实验结果。
2 结果
2.1 载玻片浸渍法对朱砂叶螨的触杀作用
中药醇提物作用优于中药水提物，中药水提物几乎无作用，见表1。苦皮藤、苦参、苍耳子、甘遂、百部醇提物分别对朱砂叶螨具有很强的触杀作用，毒力较强。从校正死亡率分析，在相同浓度下，苦皮藤、苦参、苍耳子、甘遂、百部对朱砂叶螨触杀作用较其他5味药强。当这5味药醇提物按照一定比例配伍后，单味药稀释100倍，其校正死亡率明显高于单味药醇提物，见表2。
2.2 微量点滴法对甘蓝蚜的触杀作用
醇提物作用明显优于水提物，瑞香狼毒、百部、藜芦、苍耳子乙醇提取物对甘蓝蚜有较强的杀灭作用，见表3。从校正死亡率分析，瑞香狼毒、百部、藜芦、苍耳子醇提物在相同的浓度下校正死亡率明显高于其他几味药和中药水提物，将这4味药醇提物按照一定比例配伍后，复合物校正死亡率明显高于单味药，见表4。
2.3 采用虫体浸渍法对黏虫的触杀作用
10味中药水和醇提物对黏虫的触杀实验中，只有百部醇提物对黏虫具有触杀作用，且毒力较强，其他几味中药水和醇提物均无作用。5次重复实验后其校正死亡率为96.7%。
3 讨论
采用10种中药提取物，以载玻片浸渍法、微量点滴法、虫体浸渍法分别实验。结果表明，中药水提物对害虫无抑制作用和触杀作用；但醇提物作用较好，百部对黏虫、蚜虫、朱砂叶螨均有触杀作用，苦皮藤、苦参、苍耳子、甘遂醇提物对朱砂叶螨触杀作用较好，瑞香狼毒、百部、藜芦、苍耳子对甘蓝蚜触杀作用较好；经混配后其触杀作用增强。
10种常用杀虫中药分别来自不同的科，其不但在治疗疾病的时候有很好的疗效，而且由于它们的偏性，对植物虫害也有防治作用。其中，瑞香狼毒、藜芦、甘遂、雷公藤、苍耳子均为有毒性的中药，以其毒性来防治病虫害早有研究，其单味药及从中分离出来的化学成分对害虫有触杀作用。有研究显示，藜芦碱、苦参碱、鱼藤酮和烟碱苦参碱对害虫具有较强的胃毒和触杀作用[7-8]，但中药混配作用触杀害虫的实验报道目前较少。本实验经过单味药筛选后，经中药混配研究，发现中药混配其药效明显强于单味药，其药效学机理及有效成分有待进一步研究。
另外，本实验仅为室内毒力测定，未涉及田间药效，为准确评价所试药剂对害虫的毒杀作用，今后应对田间防效试验做进一步研究。
参考文献：
[1] 贝纳新，高萍，石承民，等.植物源杀虫剂研究进展[J].沈阳农业大学学报，2002，33（4）：309-314.
[2] 张丽艳，赵茜，吴建忠.中药配伍的原理及其在杀虫植物配伍中的应用[J].安徽农业科学，2013，41（11）：4832-4833.
[3] 郝乃斌，戈巧英.中国植物源杀虫剂的研制与应用[J].植物学通报， 1999，16（5）：495-503.
[4] 慈颖，马爱敏，张顺合.植物源杀虫剂有效成分提取技术的研究进展[J].中华卫生杀虫药械，2009，15（2）：166-168.
[5] 王国夫，钟俊燕，胡春霞.苍耳有效成分的提取及其杀虫活性的研究[J].植物保护，2010（3）：155-157.
[6] 胡江川，孙爱芹，路明花.苦楝皮活性成分对几种地下害虫的杀虫效果研究[J].北方园艺，2012（7）：147-149.
[7] 徐河山，马雅军.植物源杀虫剂作用方式和机理的研究进展[J].热带医学杂志，2006，6（6）：743-746.
[8] 和玉华，杨婧，谢雯颖，和润喜.微量点滴法测定植物提取物对绣线菊蚜的触杀作用[J].北方园艺，2010（4）：167-169.