测定中草药有效成分和抗氧化作用

马俊梅

开封市中医院药剂科，河南开封 475000

[摘要] 目的 为了研究中草药中含有的有效成分，同时筛选出中草药中具有排除自由基功能的自由基清除剂，以便维护人体正常功能。方法 选取2012年7月—2013年7月在该院使用中草药进行住院治疗的病患164例，这些病患来自该院各个诊疗科室，回顾分析这些病患的临床资料。联合使用高效液相色谱与串联质谱（HPLC-MS/MS）定量检测分析法鉴定当归、五味子、三七等中药的有效成分，分析提取物中氧自由基的清除功能，并研究保护身体DNA不受损伤的作用。同时对阿魏酸、五味子提取物、三七提取物、等中草药排除自由基，保护人体机能的作用。结果 联合使用HPLC-MS/MS定量检测分析法能够快速鉴定人参中的提取物含量，包括：咖啡酸、阿魏酸等物质的含量。阿魏酸、苯酚、三七总皂苷等中草药提取物排除羟基自由基半抑制浓度分别为：2.95 μg/mL，3.1μg/mL， 58.7 μg/mL，对比其浓度，差异有统计学意义（P<0.05）；排除超氧阴离子自由基半抑制浓度分别为：0.45 μg/mL，0.042 μg/mL，167 μg/mL，对比其浓度，差异有统计学意义（P<0.05）。阿魏酸与苯酚能有效排除羟基自由基与超氧自由基的能力最强，三七总皂苷能力最弱。结论 当归、五味子等中草药提取物都具有抗氧化作用，其中白术在保护DNA方面效果最佳。

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关键词 中草药；有效成分；测定；抗氧化作用；对比分析

[中图分类号] R284 [文献标识码] A [文章编号] 1674-074２（２０１4）05（c）－０049-02

[作者简介] 马俊梅（1971.3-），女，河南开封人，本科，主管药师，研究方向：中药。

自由基具有十分重要的生物功能，和心肌缺损、衰老、动脉硬化等疾病有关。在正常条件下，自由基能在机体内通过酶自行反应，一些生理作用还需要自由基加入，所以，机体通过自由基产生和消失维持体内无害、稳定的自由基浓度。但是，当自由基产生和消失失去平衡后，会对机体造成损害。主要表现在使DNA受损，严重时会导致细胞死亡、癌症发生、基因突变等。有资料显示[1]，中草药中含有的抗氧化剂能将自由基有效排除，保证机体内自由基平衡，避免DNA受损，对维护体内细胞正常代谢意义重大。该研究的目的主要是通过鉴定，检测中草药中药物的有效成分，经鉴定具有不良反应小、治疗效果独特、安全系数高、资源丰富等优点，目前已经成为抗自由基的基础药物。为了有效测定中草药中抗氧化作用的药物成分，该研究于2012年7月—2013年7月间使用HPLC-MS/MS定量检测分析法鉴定中草药中的有效成分，并对其抗氧化作用回顾分析，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取在该院使用中草药进行住院治疗的病患164例，其中男性79例，女性85例；年龄最小21岁，最大79岁，中位年龄为（48.3±2.7）岁；住院最短时间为3 d，最长17 d，平均住院时间为（7.6±1.9）d；按照诊疗科室分类：46例心脏内科，38例肾脏内科，24例肺内科；29例肠胃内科；27例妇科。

1.2 鉴定当归成分的方法

该研究使用HPLC-MS/MS定量检测分析法鉴定当归中的有效成分，这种方法能够同时快速鉴定阿魏酸。高效液相色谱仪为美国Agilent公司生产的，质谱仪的型号为API3000，美国生产，配备电喷雾离子源[2]。高效液相色谱的色谱柱是ODSC18柱，流动液相色谱：甲醇—0.1%的乙酸铵水溶液；流速：0.2 mL/min，体积：3 μL，温度为20 ℃。将水杨酸作为内标物进行定量检测。正确称量当归提取物15 mg。超声溶解在含有10 μg/L水杨酸的甲醇中，定容到100 mL，然后过滤，在用含有10 μg/L水杨酸的甲醇将其提取物稀释成1 μg/mL，等待检测。

1.3 统计方法

使用spss 11.0统计学软件对该次研究病患的临床资料以及排除超氧阴离子自由基半抑制浓度分、排除超氧阴离子自由基半抑制浓度等数据进行统计学分析，计量资料用均值±标准差（x±s）表示，采用t检验。

2 结果

3种中草药提取物排除羟基自由基与排除超氧阴离子自由基的半抑制浓度组间差异有统计学差异意义（P<0.05）。并且，阿魏酸与苯酚排除羟基自由基与超氧自由基的能力最强，三七总皂苷能力最弱。

对比3种中草药提取物排除羟基自由基与排除超氧阴离子自由基半抑制浓度，见表1。

3 讨论

高效液相色谱（HPLC）是一种研究植物化学性质的常规技术，在分析、纯化、检测、分离天然产物中得到广泛应用[3]。质谱（MS）在分析天然产物分子方面灵敏度最高，不仅能给出化合物正确的分子式与分子量，还能提供化合物结构等重要信息。因质谱仪具有很高的分辨能力，有研究资料显示，在鉴定生物结构时，HPLC-MS的选择性、正确性、灵敏性都较高，所以，越来越广泛的应用在重要成分鉴定中。串联质谱对于提高质谱分辨率与正确性具有重要意义[4]。目前，在测定中药有效成分中，高效液相色谱是一种较为常用的检测方法，它能有效测定中药药物中的有效成为，准确度高。

自由基在很多生物内都存在，并且活跃异常，能与各种物质发生反应，导致核酸断裂、组织脂质过于氧化、多糖分解，这些都与机体心肌受损、衰老、肌瘤、细胞吞噬、辐射有关为了有效筛选中草药中自由基的清除剂，该研究对4种天然中草药提取物排除氧自由基活性进行对比[5]。羟基自由基在氧自由基中的氧化能力最强、活性最高、毒性最大，检测较为困难。该文使用流动注射技术对羟基自由基进行检测，具有精度高、速度快、连续性好等优点。从该研究结果中可以看出，阿魏酸、苯酚、三七总皂苷这3种中草药提取物，它们均能有效清除超氧阴离子自由基与羟基自由基的活性，并且不同提取物清除两种自由基的差异较大[6]。在排除羟基自由基时，阿魏酸与苯酚最强，三七总皂苷最弱；排除超氧阴离子自由基时，阿魏酸、苯酚最强，银杏稍弱，三七总皂苷最弱，和以往研究文献相一致。所以，在清除两种自由基时，苯酚与阿魏酸的能力最强[7]。

综上所述，当归、五味子等中草药提取物都具有抗氧化作用，其中白术在保护DNA方面效果最佳[8]。

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参考文献

[1] 吴玫涵，聂凌云.气相色谱-质谱联用技术在我国中药研究中的应用[J].解放军药学学报，2012，18（12）：195-197.

[2] 徐智秀，肖红斌.高效液相色谱-质谱-质谱法分析三七总皂苷[J].色谱，2011，18（16）：521-524.

[3] 王颖，盛龙生，楼凤昌.安登魁.银杏总酸中有关成分的LC-DAD-API-MS分析[J].中国药科大学学报，2011，32（15）：371-374.

[4] 孟申.中药有效成分抗氧化作用的实验研究[J].中国药理学通报，2012，23（9）：112-114.

[5] 郭静. 花椒中有效成分的分析测定方法和抗氧化作用研究[J].西南大学，2013，14（8）：177-180.

[6] 陈战国. 中草药有效成分定量分析方法研究新进展[J].陕西师范大学学报：自然科学版，2013，17（3）：187-189.

[7] 张显忠.丁香等中草药有效成分的提取方法和抗菌活性关系的研究[J].泰山医学院学报，2013，14（5）：219-221.

[8] 朱华.抗癌中草药有效成分的研究进展[J].时珍国医国药，2012，18（1）：245-247.

（收稿日期：2014-02-20）