深静脉血栓形成动物模型的建立方法及其进展

张侠陵 熊国祚

南华大学第二附属医院，湖南衡阳 421000

[摘要] 下肢深静脉血栓形成(deep vein thrombosis of lower extremity，DVT)作为血管外科的常见疾病，其动物模型的建立是研究疾病的发病机制和治疗方法的重要条件。该文对近年来对于各种实验性深静脉血栓动物模型的方法及其利弊进行概述，为今后动物实验提供充足的参考依据。

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关键词 深静脉血栓形成；动物模型；DVT

[中图分类号] R725 [文献标识码] A [文章编号] 1674-074２（２０１5）02（c）－０197-02

随着医疗水平的进步，深静脉血栓形成因其高发病率、高致死率逐渐受到临床医生的重视。目前对其病因的研究仍处于假设阶段。动物模型为研究DVT的发病机制和评价对应的治疗方法提供了可能，迄今用于深静脉血栓动物模型约有50年的历史，现将各主流方法报道如下。

1 下腔静脉结扎法

1.1 大鼠模型

此为最经典的模型,1980年Reyers等[1]通过结扎大鼠下腔静脉第一次建立起深静脉血栓动物模型：将大鼠麻醉后，沿腹白线进腹，分离出下腔静脉，于左肾静脉下方结扎其下腔静脉，缝合后2~6 h打开腹腔，可见血栓形成。此方法结扎后3 h约60%~80%的小鼠可形成血栓，6 h后血栓形成率可达100%。在对于药物在体内抑制血栓形成的研究中，此法有广泛的应用。

也有学者在Reyers的方法的基础上做出许多改进，如张智辉等同时结扎下腔静脉和髂总静脉，建立的大鼠深静脉血栓模型,证明白细胞在DVT形成中起重要作用。并将各种改良法进行比较，证实采用缩窄下腔静脉+阻断夹阻断+结扎肾静脉至髂静脉水平的下腔静脉各属支的方法，可以建立起稳定的大鼠DVT疾病模型[2]。赛力克·马高维亚等[3]在备制大鼠深静脉血栓模型时，将普通交换导丝放置于左肾静脉与下腔静脉汇合处下方，与下腔静脉一并结扎，1 h后抽出导丝。成功建立出，近心端保持通畅的深静脉血栓动物模型，此法有利于观察药物溶栓或抗栓塞作用的效果。

1.2 兔模型

可能因为经济适用性等原因，以兔下腔静脉结扎制备深静脉血栓模型者远小于大鼠。方法如大鼠模型，在左肾静脉下方结扎下腔静脉。兔模型下腔静脉较粗大，可用于静脉造影等介入实验。

2 股静脉阻断法

Rhodes等[4]通过暂时阻断股静脉近、远两端的方法建立了深静脉血栓犬模型。方法如下：将犬麻醉后，分离出股静脉，分别结扎股静脉近、远两端约48 h。模型成功率可达97%~100%。此方法还可用于兔模型中，因避免开腹可减少动物创伤，提高实验动物存活。

造模原理为局部血液瘀滞，内皮细胞损伤，启动内源性凝血系统，同时异物留置血液中启动外源性凝血系统，促使血栓形成。Knight 等[5]在麻醉动物后（犬、兔）沿股静脉走形，切开暴露股静脉，阻断股静脉两端后，于近心端插入螺旋铜丝，逐层缝合后，建立起深静脉血栓动物模型。此法结合放射性核素标记法，在研究新、旧血栓成分上有广泛的应用。

3 股静脉电刺激法

方法如下：先给大鼠每日肌肉注射地塞米松磷酸钠，使血液保持高凝状态。再将大鼠麻醉，经股内侧行纵行切口，分离出长约1.5 cm的股静脉，股静脉的远、近端分别接通正、负极电源，1.5 mA,持续7 min。即可形成血栓。杨军[6]应用此法根据形成的血栓的湿重与纤溶指标，研究药物对于血栓形成的抗凝作用。此法可在保持血管完整性同时形成血栓，对后续切片观察提供了便利。

4 凝血酶直接注入法

韩力群等[7]将实验犬麻醉后，切开暴露右侧股静脉，穿刺置入导管，缓慢注入500U凝血酶。并用彩色超声多普勒动态观察血栓形成过程，成功制备深静脉血栓动物模型。也可将目标血管暂时阻断后，注入凝血酶。通过阻断血流、损伤血管壁、激活凝血因子提高模型制备的成功率。

5 创伤法

创伤性深静脉血栓动物模型，是具有骨科特点，符合骨科临床实际的新型动物模型。赵学凌[8]利用自制的打击装置，以不同的打击强度，打击大鼠双侧大腿近端外侧，制作出骨折组（瞬间打击能量为4.2 J）,创伤组（瞬间打击能量为2.4 J），两种大鼠模型。然后均行髋人字石膏固定，成功建立大鼠创伤性深静脉血栓模型，实验证明骨折组在第7 d静脉血栓形成率为85%，为研究创伤性深静脉血栓形成的理论基础提供了实验依据。宋恩等[9]将大鼠股静脉分离，并用血管钳夹闭股静脉约3 s，再用双后肢髋人字石膏外固定予以制动，最终建立起创伤性深静脉血栓动物模型。

6 家兔耳缘静脉血栓法

将家兔耳缘静脉分离出2 cm长的静脉段,结扎上下两端,并暂时阻断两侧分支血管以阻止血流。抽出该段血液,并注入凝血酶。暂时打开两侧分支血管,使血液充盈入目标静脉段中，再次阻断分支血管，使目标静脉段内形成血块。取下阻断分支血管的血管夹,分别打开结扎线,通过透射光观察血栓消失及血流恢复的时间,此法可以观察药物的溶栓作用。

7 展望

研究DVT发病机制、病理变化和治疗方法需要合适的动物模型。迄今，建立深静脉血栓动物模型，主要为阻断静脉血流，造成血液淤滞，激活内源性凝血系统，诱发血栓形成。也有许多以注入血栓诱导剂（如凝血酶），加以机械性损伤血管内皮细胞。其中下腔静脉结扎法最为方便易行且经济常用，其大鼠血栓模型，普遍用于药物的抗血栓的机制的研究;对血管介入溶栓、取栓等治疗及对血栓影像学诊断的研究,需要较为粗大的犬、兔的股静脉，其缺点在于实验费用高昂、造模后管理难度大等方面。侯旭等[10]，通过比较正常动物和老龄动物的深静脉血栓动物模型中下腔静脉的拉伸力学特性，表明不同年龄层的动物静脉血栓形成的条件有所差别。国外学者Mosesson MW[11]，利用转基因技术，制备的含人体纤维蛋白酶原基因的转基因老鼠，制作出深静脉血栓模型，证实了凝血酶-γ链序列在血栓形成中有着重要作用。使用转基因老鼠制备DVT动物模型，有助于对深静脉血栓形成的发病机制进行更深入的研究，可能成为今后的主流研究方向。目前公认DVT的发病机制是Virchow 的三大病因，即血流滞缓、血液高凝、静脉壁的损伤。从病因水平制作出DVT 模型，将是制作出符合临床实际的模型的关键，对于今后推进深静脉血栓形成防治研究有极大的帮助，同时大量文献证明中医药对于深静脉的发病、发展有良好的干预效果，因此制备出符合中医证候的深静脉血栓模型，也将是需要我们努力研究的放向。

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参考文献

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[2] 张智辉，单臻，王文见，等.下腔静脉不同处理方法建立大鼠深静脉血栓形成动物模型的比较[J].中华实验外科杂志，2012，29(9):1840-1842.

[3] 赛力克·马高维亚，王护国，罗军，等.一种适合动态研究的大鼠深静脉血栓动物模型[J].中国普外基础与临床杂志，2008，15（6）：408-411.

[4] Rhodes JM,Cho JS. Thrombolysis for experimental deep venous thrombosis maintain valvular competence and vasoreactivity[J].J Vase Surg ,2000，31（6）：1193-1205.

[5] Knight LC ,Maurer Ah ,Ammar IA ,et al . Tc - 99m antifibrin fragment for imaging venous thromb j:Evaluation in a canine model [J ] . Radiology ,1989，173（1）：163-169.

[6] 杨军,屈立志,杨霄,等. 通塞脉片对深静脉血栓形成纤溶功能的实验观察[J].中药新药与临床药理,2003（1）：32-33

[7] 韩力群，杨斌，涂宏钢，等.彩色多普勒超声可持续动态观察的犬急性下肢深静脉血栓动物模型的构建[J].中华医学超声杂志(电子版)，2011，8（12）：2472-2479.

[8] 赵学凌，吴雪梅，王兵，等.大鼠创伤性肢体深静脉血栓形成新型动物模型的建立[J].昆明医学院学报，2005，26(1):4-8.

[9] 宋恩，李云建，章玉冰，等.Changes of arginase Ⅰ expression in rat deep vein thrombosis modelsJournal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineening Researrh,2011(7):1155-1158.

[10] 侯旭晖，杨松柏，尹健，等.老龄深静脉血栓动物模型下腔静脉的力学特性[J].生物医学工程研究，2012（1）：78-30.

[11] Mosesson MW，Cooley BC，Hernandez I，et al. Thrombosis risk modification in transgenic mice containing the human fibrinogen thrombin － binding gamma＇ chain sequence[J].J Thromb Haemost，2009，7（1）：102-110.

（收稿日期：2014-11-18）