荧光定量PCR在病原微生物检测中的应用

李　晶

南阳理工学院 河南省南阳市 473004

【摘　要】目的：探讨荧光定量PCR 在病原微生物检测中的应用价值。方法：选取南阳市第一人民医院收治的800 例患者作为研究对象，其中淋球菌（NG）感染206 例，沙眼衣原体（CT）感染358 例，解脲支原体(UU) 感染236 例。使用荧光PCR 检测仪进行检测。结果：研究结果发现CT 检测，阳性例数为38 例，阳性率为10.61%，NG 阳性率为14.08%，阳性率最高，UU 阳性检测率为14.41%，仅次于NG。结论：采用荧光定量PCR 对病原微生物进行检测，可以有效提高检测的准确度，值得推广使用。

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关键词 荧光定量PCR；病原微生物；淋球菌；解脲支原体

荧光定量PCR，是一种新的定量测验技术，这种检测技术有效保留了常规PCR的优势，具有较高的特异性和灵敏性，而且还可以有效降低检测的假阳性率。对此，本院对荧光定量PCR 在病原微生物检测中的应用价值进行了研究，具体研究情况如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取南阳市第一人民医院门诊科、泌尿科以及皮肤科收治的患者800 例作为研究对象，其中男性390 例，女性410 例，其中淋球菌（NG）感染206 例，解脲支原体（UU）感染236 例，沙眼衣原体（CT）感染358 例。取这些患者的宫颈、尿道分泌物进行检测。

1.2 检测仪器及工具

在本研究中，使用的检测仪器为美国生产的型号为BIO-RAD iCylcer 的荧光PCR 检测仪，检测中所使用的试剂盒为核酸扩增荧光检测试剂盒。

1.3 检测原理

在进行检测时，在常规PCR 的基础上，添加了荧光双标记探针的使用，在该探针上会标记2 个荧光基团。将其中的一个荧光基团标记在探针的5′端，同时将另一个荧光基团标记在探针的3′端。通过这两个标记可以构成一个完整的能量传递结构。也就是说5′端荧光基团所发出的荧光，能够被另外一端的荧光基团所吸收或抑制。在检测中，无特异性PCR 发生时，探针的荧光信号不会发生任何的变化。但是如果有特异性PCR 扩增发生时，探针会在PCR 检测过程中，Taq 酶的5′到3′外切酶活性作用会将5 探针信号切断，从而导致切下的3′端荧光基团抑制作用会消失，而切下的5′端荧光基团信号会增长[1]。探针的3′端羟基已被去除或封闭，不具有延伸能力。荧光信号会随着PCR 产物的增长而不断增长。

1.4 检测方法

首先使冻存的细胞完全溶解，加入样品处理液，以13000r/min 将标本进行离心，10 分钟后使用RNA 去除掉上清液，完成上述操作后，采用常规碱裂解法将CT、NG、UU-DNA 提取出来。提取完成后，就可以对其进行荧光PCR 检测了。首先将各反应管放入荧光PCR 检测仪上，在不同条件下对其进行扩增，共进行42 次该循环。等到所有反应都结束后，使用电脑对所获得的数据进行分析，并计算出结果。每次检验完成后均需要做阳性和阴性对照。

2 结果

检测完成后，严格按照试剂盒上的说明，对荧光定量PCR 检测的结果进行分析，研究结果发现CT 检测，阳性例数为38 例，阳性率为10.61%，NG 阳性率为14.08%，阳性率最高，UU 阳性检测率为14.41%，见表1。

3 讨论

病原微生物种类众多，会对人的机体造成巨大影响，其中，淋球菌（NG）、解脲支原体（UU）、沙眼衣原体（CT）都是非常常见的病原微生物，患者一旦感染上这些病原微生物，会对患者的健康造成很大影响，因此，提高对病原微生物诊断的准确性具有非常重要的临床意义，可以为临床的诊断和治疗提供重要的参考作用[2]。传统对病原微生物的检测主要是通过细菌培养、细菌涂片等方式进行检测，但是这些检测方法的检测率普遍较低，且所需周期较长，会影响患者的及时治疗。

PCR 检测技术的应用在一定程度上提高了检测的准确率，早期的PCR 检测技术虽然弥补了传统检测方式的不足，但是还是存在假阳性较高等问题，无法有效发挥对临床治疗的指导作用。随着PCR 检测技术的不断发展完善，荧光定量PCR 的检测能力更强，灵敏性和特异性都较好，能够正确指导临床做出诊断，是临床治疗的重要参考，因此，应进一步加强其在临床诊治中的应用。

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参考文献

[1] 叶自霞, 杨俊, 聂福平, 王昱, 袁曾壮, 李应国, 王国民, 李贤良, 保雨,刘亚娟, 刘力. 家畜嗜衣原体TaqMan-MGB 荧光定量PCR 检测方法的建立[J].中国兽医科学,2015(04):380-384.

[2] 赵洁, 马晨, 席晓敏, 张和平. 实时荧光定量PCR 技术在肠道微生物领域中的研究进展[J]. 生物技术通报,2014(12):61-66.

作者简介

李晶（1983-），女，河南省南阳市人。大学本科学历。现为南阳理工学院助教。研究方向为生物医学。