西帕依固龈液对口腔白色念珠菌体外溶血活性研究

孙媛元

山西医科大学研究生学院口腔系，山西太原 030001

[摘要] 目的 探讨白色念珠菌的溶血活性以及西帕依固龈液对白色念珠菌的溶血活性产生的影响。方法 将白色念珠菌接种于3组沙博氏平皿培养基，其中一组加入西帕依固龈液，一组加入氟康唑，另外一组为只加培养基的对照组，检测溶血活性。结果 只加入培养基的对照组和西帕依固龈液组和氟康唑组均产生溶血现象，而西帕依固龈液组和氟康唑组的溶血现象显著减少，西帕依固龈液组和氟康唑组两者之间无显著性差异（P＞0.05）。西帕依固龈液组、氟康唑组和加培养基的对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 西帕依固龈液能使白色念珠菌感染的毒性有效降低，可以指导临床上治疗口腔白色念珠菌感染用药。

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关键词 ] 白色念珠菌；西帕依固龈液；氟康唑；溶血活性

[中图分类号] R781.5　　　[文献标识码] A　　　[文章编号] 1672-5654（2014）03（c）-0027-02

近年来，口腔念珠菌感染的发病率呈不断上升趋势，属于条件致病性疾病，临床上比较常见的一种疾病。此外，白斑、口腔扁平苔藓等疾病中口腔念珠菌感染通常提示与恶变的可能，使得该疾病近几年逐渐受到重视[1]。氟康唑是多年认可的抗真菌药，但由于其耐药性是我们一直关注的问题。因此，药物的合理使用是我们更加关注的话题。西帕依固龈液是有抗真菌作用的民族中药，用单味药材没食子经提取精制而成的漱口液，具有固涩、燥湿、止血、消炎和防腐之功效，广泛地应用于口腔的卫生保健[2]，在抗真菌药物中也独具特色。本实验通过研究西帕依固龈液对口腔白色念珠菌的溶血性的影响，了解其对白色念珠菌的毒力，对临床用药提供理论依据。

1 实验材料和实验方法

1.1 材料

菌种 : 白色念珠菌 Candidaalbicans ATCC 10231(中国山西生物制品所菌种保存中心)。沙博氏培养基(陕西西安微生物所)。药物: 西帕依固龈液(新疆奇康哈博维药有限公司，国药准字 Z65020012)、氟康唑分散片（山西太原制药厂有限公司）。

1.2方法

1.2．1 最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentra-tion，MIC） MIC是指能抑制生长的最低药物浓度，采用美国国家临床实验室标准化委员会推荐的微量肉汤积压稀释法 （national com-mittee for clinical laboratory standards，NCCLS M27-A）规定的方法检测MIC[3]。

1.2．2 将白色念珠菌接种于沙博氏液体培养基，30℃培养 24 h后备用 培养 24 h后的菌液，将它稀释成为浓度约为1×108个/mL的实验菌工作浓度，即取 100 mL细菌混悬液，接种于3组沙博氏平皿培养基（3%葡萄糖），从60株临床菌株中挑选白色念珠菌菌株，每组15株[4]。其中一组加入西帕依固龈液，一组加入氟康唑（使其终浓度为 0.5MIC），另外一组为只加培养基的对照组。37℃培养 48h。

1.2．3 检测溶血性 指标：测定菌落直径和总直径（菌落+溶血环）

溶血指数计算方法：溶血指数=菌落直径/总直径。

1.3 统计学分析

采用 spss 13.0 软件进行数据描述和统计，描述性统计分析采用比，均数±标准差，推断性统计分析采用析因方差分析的方法，用其进行交互作用的显著性推断。检验标准 α=0.05。

2 结果

只加培养基的对照组和西帕依固龈液组、氟康唑组均有溶血现象，但西帕依固龈液组和氟康唑组的溶血现象显著变少。溶血指数检测结果分别为：西帕依固龈液组溶血指数为0.3241、氟康唑组溶血指数为0.3315，对照组溶血指数为0.2531，西帕依固龈液组和氟康唑组溶血指数两者溶血指数的交互效应无统计学意义（F＝3.974，P＞0.05）。西帕依固龈液组、氟康唑组与未干预对照组比较，均有显著性差异，分别为（F=2.521，P=0.015）、（F=2.612，P=0.020）。

3 讨论

口腔念珠菌病(oral candidiasis)是白色念珠菌引起的口腔黏膜的真菌感染性疾病[5]。近年来口腔念珠菌感染逐年呈增长趋势，而且为条件致病菌，常寄生于人的开放性腔道，在机体免疫力降低时容易感染此菌，所以难治疗且易复发。因此，选择有效、使用方便而无明显副作用的药物进行治疗白色念珠菌，以及预防其感染等是我们目前面临的重要问题之一。

念珠菌的致病性和毒力是一组因子决定[6-7]。有二相性转换、疏水性、粘附性、磷脂酶活性、溶血性。二相性包括：能产生菌丝的念珠菌有毒力且毒力增强，有毒力的念珠菌形态学已经由酵母相向菌丝相的转换了；细胞表面疏水性在黏附宿主细胞、细胞外基质蛋白和导管以及躲避吞噬细胞的监视方面，有着重要作用；白色念珠菌通过识别中间物质黏附素来识别粘附宿主[8-9]；磷脂酶可以分解宿主细胞膜磷脂使细胞膜通透性增高，从而入侵宿主细胞 ；溶血性是病原微生物破坏亚铁血红素后提取铁元素的能力，提取铁元素的能力在感染过程中发挥重要作用。1994 年MANNS描述了白色念珠菌被羊血琼脂培养基诱导后产生一个半透明的完全溶血环，这是念珠菌溶血性的首次报道[10]。在本实验中，我们发现实验组和未干预的对照组均发生溶血反应，这与Samaranake LP等[11]的实验结果相吻合。Samaranake LP的研究结果认为：检测口腔白色念珠菌体外均发生溶血活性反应。

抗真菌药物氟康唑的耐药问题变得日益严重，使临床用药遇到棘手问题，因此合理用药作为解决耐药的新思路。因此本实验通过西帕依固龈液和氟康唑分别作用口腔白色念珠菌后，检测其与未干预对照组溶血活性有无差异性。结果表明虽然未干预对照组和实验组均有溶血现象，但西帕依固龈液组和氟康唑组的溶血现象明显变少，西帕依固龈液组和氟康唑组的溶血性与未干预对照组有显著性差异（P<0.05）。氟康唑是在临床中治疗口腔白色念珠菌疗效明确的唑类抗真菌药，本实验的结果证实西帕依固龈液和氟康唑对白色念珠菌溶血活性有相似的作用，提示西帕依固龈液的使用可以使口腔白色念珠菌毒性降低，可以作为临床治疗口腔白色念珠菌的药物。

西帕依固龈液主要成分是没食子，属于具有特色的民族药。其没食子抗真菌、抗病毒、抗细菌等方面都具有明显的疗效。也有报道称西帕依固龈液对口腔白色念珠菌有一定的治疗作用[12]。本实验也证实西帕依固龈液对口腔白色念珠菌毒力的降低有一定的影响。白色念珠菌的毒力因素还包括二相性转换、疏水性、粘附性、磷脂酶活性等[13]，下一个课题我们将探讨西帕依固龈液对口腔白色念珠菌其他毒力因素的研究，用以指导临床用药。

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（收稿日期：2014-02-14）