玄赤归镇痛胶囊质量标准研究

申祥国

湖南省邵阳市中西医结合医院药剂科，湖南邵阳 422000

[摘要] 目的 建立玄赤归镇痛胶囊的质量标准。方法 实验中主要利用TLC检测方法对相关中药，如：当归、川芎、延胡索、三七等进行定性检测；使用HPLC法测定三七中三七苷R1的含量。结果 薄层色谱图斑点清晰，阴性对照无干扰；三七皂苷R1在71.5～1023μg/mL范围内线性关系良好，平均回收率 91.7%，RSD为1.4%（n=5）。结论 该方法专属性强，灵敏度高，重现性好，可用于玄赤归镇痛胶囊的质量控制。

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关键词 ] 玄赤归镇痛胶囊；三七皂苷R1；TLC；HPLC

[中图分类号] R994.5　　　[文献标识码] A　　　[文章编号] 1672-5654（2014）07（c）-0179-02

玄赤归镇痛胶囊由延胡索、三七、乳香、没药、、红花、血竭、川芎、当归、续断、骨碎补、儿茶、赤芍、木通、大黄等药物组成，为我院相关药物材料研制的自制药品。根据本人经验：玄赤归镇痛胶囊临床使用效果较好，具有活血化瘀，行气止痛。用于跌打损伤所致的骨折、筋伤气滞证。为了提高药物质量，本人将对当归、川芎、续断、三七等药物进行定性测定，并对三七中的三七皂苷R1的含量等进行测定，现分析报告如下。

1 仪器与试药

本次调研中主要实验LC-20A高效液相色谱仪进行检查，其相关检测仪器如此：LC-20AT泵、SPD-M20A检测器；AB204-N型电子天平等。

试药三七皂苷R1对照品（110745-201318 ，含测用）、川芎对照药材(120918-200608 )、当归对照药材( 10927-200613 )、续断对照药材( 121033-200608 )、延胡索乙素对照品(110726-200409 ) 、人参皂苷Re对照品 ( 110703-201128 ) 、人参皂苷Rg1 对照品( 110754-200421 ) 均购自中国药品生物制品检定所；玄赤归镇痛胶囊（130704、131010、140116）为我院制剂室提供。

2 薄层色谱鉴别

实验中，取本品10粒内容物，加乙醚20 mL，超声处理5分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。取玄赤归镇痛胶囊去川芎、当归的阴性样品，同法制成去川芎、当归的阴性样品溶液。另取当归对照药材和川芎对照药材各2 g，分别加乙醚20 mL，在超声环境下进行15 min 的处理，滤过，滤液挥干，残渣分别加乙酸乙脂1 mL使溶解，作为对照药材溶液。采用照薄层色谱法对上述三种溶液进行实验，实验中分别将其放在硅胶G薄层板上，使用以环己烷－乙酸乙酯作为其展开剂，并进行相关其他步骤，如：展开，取出，晾干等，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。缺川芎、当归的阴性样品无干扰。结果见图1。

实验中，选择10粒本品内容物向其中加入50 mL甲醇，在超声下进行30 min的处理，并除去废液，向残渣内加入100 mL水，并将其PH控制为碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10 mL，合并乙醚液，并将其烘干，然后向残渣中放入1 mL甲醇进行溶解等。实验中选取玄赤归镇痛胶囊去延胡索的阴性样品，采用相同的方法进行阴性溶液制备。另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于以含1%氢氧化钠的羧甲基纤维素溶液为粘合剂制备的硅胶G板上，以甲苯－丙酮(9∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中约3 min后取出，挥尽吸附的碘后, 置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，缺延胡索的阴性样品无干扰。结果见图2。

续断取本品10粒内容物，加浓氨试液10 mL，混匀，放置1小时，加二氯甲烷30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液置分液漏斗中，用盐酸溶液(4→100)30 mL分次振摇提取，提取液用浓氨试液调节pH值至10，再用二氯甲烷20 mL分次振摇提取，合并二氯甲烷液，浓缩至0.5 mL，作为供试品溶液。取玄赤归镇痛胶囊去续断的阴性样品，同法制成去续断的阴性样品溶液。另取续断对照药材3 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚－丙酮(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺续断的阴性样品无干扰。具体见图3。

三七取本品20粒内容物，加水25 mL，振摇10 min，滤过，滤液用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15 mL，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次10 mL，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取玄赤归镇痛胶囊去三七的阴性样品，同法制成去三七的阴性样品溶液。另取人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品及三七皂苷R1对照品，加甲醇分别制成每1 mL各含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述五种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇－乙酸乙酯－水(4∶1∶5)的上层溶液为展开剂，展开，取出, 晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图4左；置紫外光灯(365 nm)下检视，显相同的荧光斑点，缺三七的阴性样品无干扰。见图4右。

3 三七皂苷含量测定

3.1 色谱条件色谱条件色谱柱

Agilent Hypersil(250 mm×4.0 mm,5 μm)C18柱；流动相：乙腈水(15∶85 12 min；30∶70 45 min；15∶85 v/v)；流速：1 .0mL/min；柱温35℃；检测波长203 nm；进样量10 μL，按上述色谱条件试验，三七皂苷R1 可达基线分离，且分离效果良好，R≥1.5；按三七皂苷R1 峰计算。

3.2 对照品溶液的制备

精密称取三七皂苷R1 对照品35 mg，置于5 mL容量瓶中，并使用甲醇进行溶解和稀释，将其作为对照品溶液。

3.3 供试品溶液的制备

实验中选择10粒药物制备溶液，精密称定，研细，混匀，取约1.0 g，精密称定，加入75%甲醇10 mL，浸泡约12 h，在60℃下，超声45 min，补足甲醇至刻度，离心，取上清液，过0.45 μm滤膜，将其作为供试品溶液。

3.4 阴性样品溶液的制备

实验中取其他处方药物，根据相关制备工艺等进行三七阴性样品的制定，并根据相同的操作步骤配置缺三七的阴性样品溶液。

3.5 线性关系研究

实验中选取0.1、0.25、0.5、1.0、1.5 mL三七皂苷R1对照品溶液，分别置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释到刻度，制成标准品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ，各取20μL，按色谱条件进行峰面积的测定，实验中将对照品（C）作为其横坐标，峰面积（A）为纵坐标，描绘相关曲线，并根据曲线得出方程：在的范围内，A＝5.65C＋116.8(r=0.999 1,n=5)。结果表明三七皂苷R1 在71.5～1023 μg/m范围之内表现为相关性。

3.6 精密度试验

实验中准确吸取三七皂苷R1以及对比实验Ⅲ溶液，根据上述要求进行色谱条件检测，进样20 μL，重复进行5次，实验结果显示：该检测方法精密度比较好。

3.7 稳定性试验

准确吸取三七皂苷R1以及 对照品Ⅲ溶液，将其在不同的时间段内放进10 μL测定峰面积值积分值，三七皂苷R1 RSD为1.45%(n=8)，实验结果显示：样本容易在24 h相对比较稳定。

3.8 重复性试验

实验中取5份相同样品（130704），根据上述步骤进行实验，实验结果显示：这种检测方法重复性较好。

3.9 回收率试验

实验中吸取实验容易，分别精密加入三七皂苷R1 对照品溶液，按含量测定项下方法，计算回收率。见表1。

3.10 三批样品样品=三七皂苷R1的含量

结果见表2。

4讨论

考察TLC时，采用提取此方法得到的供试品在当归、川芎、续断对照药材斑点相同，且没有干扰，此外我们还考察了血竭、骨碎补药材因图谱中阴性有干扰未列入标准中；采用此方法得到的供试品色谱图中，在与延胡索乙素对照品、人参皂苷Re、三七皂苷R1、三七皂苷Rg1色谱图上斑点相同且没有干扰，故列入质量标准中。

方中三七为贵重药材且在方中起重要作用，其主要成分皂苷，近年来对三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1的含量研究较多，研究方法较成熟，可借鉴，三七皂苷R1 为特异成分，故选择三七皂苷R1 为含量研究对象，以控制药品质量。

本次调研实验方法专业性较强，能够多次进行重复实验，并且这种检测结果精度比较高，药材回收率也比较多，值得推广使用。

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（收稿日期：2014-04-20）