化学发光法对丙肝抗体筛查阳性的结果分析

摘  要：目的：分析化学发光法进行丙肝抗体筛查的结果。方法：选取2019年6月-2020年5月拟行有创检查前进行感染性疾病筛查的患者8 773例，行化学发光法检测丙肝抗体。初筛阳性者用荧光聚合酶链反应(PCR法)进行丙肝病毒复制量HCV-RNA检测。结果：检出丙肝抗体阳性126例，阳性检出率为1.4%；其中发光强度数值1～5的41例，发光强度数值>5的85例。丙肝病毒核酸复制量HCV-RNA检测中，阳性(复制量>103)23例(18.25%)。其中，抗体发光强度低值阳性41例中，HCV-RNA阳性2例；抗体发光强度高值阳性85例中，HCV-RNA阳性21例。结论：丙肝抗体阳性需结合丙肝病毒复制量检测来进一步判断丙肝的感染情况，不宜对丙肝抗体滴度进行过度关注或重复检测等，造成不必要的人力物力浪费。

关键词：化学发光法 丙肝抗体 丙肝病毒核糖核酸定量

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的一种常见传染病。据统计，丙肝感染率约为3%，每年约有3.5万人感染[1]。HCV在肝细胞中的定植和复制会逐渐破坏肝脏结构，损害肝脏功能。丙型肝炎主要分为病毒性肝炎、急性病毒性肝炎和慢性病毒性肝炎以及肝硬化。急性病毒性肝炎患者多有无力、恶心、疲软、尿黄等症状；慢性病毒性肝炎主要表现为疲劳和食欲不振，HCV-RNA持续表达为阳性[2]。在过去20～30年，感染丙肝病毒的人群中，有10%～20%的人发展为肝硬化[3]。丙肝具有高度传染性，目前还没有疫苗接种或特殊治疗方法。早期诊断和干预是防止疾病恶化的重要手段。化学发光法具有较高的敏感性和特异性，窗口期短，应用广泛[4]。化学发光法分析利用免疫反应和化学发光的结合来检测大量的物质，具有很高的灵敏度[5]。本研究选取在我院拟行有创检查前，进行感染性疾病初筛的8 773名患者进行化学发光法的丙肝抗体初筛，对其中阳性患者同时进行HCV-RNA的检测，通过整理数据，研究两种方法在丙型肝炎初筛和诊疗中的作用。现报告如下。

资料与方法

选取2019年6月-2020年5月拟行有创检查前进行感染性疾病筛查的患者8773例，男5 968例，女6 808例；年龄4～94岁，平均(48.73±4.58)岁。展开临床研究，应用化学发光法初筛丙肝抗体，血清标本均符合规定检测标准，排除其余患病可能。

方法：按照操作规范从患者肘部采静脉血3 mL，置于一次性分离胶采血管内，以3 000 r/min的速度离心10 min，分离血清待检。化学发光法检测丙肝抗体：应用日本希森美康全自动化学发光仪及配套封闭试剂进行检测。根据说明书，发光强度值1.0为临界值，>1.0为丙肝抗体阳性，<1.0为丙肝抗体阴性。丙肝病毒复制量：应用罗氏Z 480荧光PCR检测仪，试剂厂家为上海之江生物，进行HCV-RNA的检测，复制量>103为阳性有传染性，<103表示未检出病毒，为阴性。

统计学处理：数据应用采用EXCEL和spss 22.0软件处理，计数资料以[n(%)]表示，采用χ2检验；P<0.05为差异有统计学意义。

表1 丙肝抗体阳性患者进行HCVRNA的检测结果分析(n)

结果

化学发光法检测结果：对8 773例患者进行丙肝抗体检测，化学发光法检出丙肝抗体阳性126例，阳性检出率为1.4%；其中发光强度数值1～5的41例，发光强度数值>5的85例。

荧光PCR检测结果：对126丙肝抗体阳性标本进行荧光PCR的检测，大于103为阳性，有传染性。丙肝抗体阳性标本中，发光强度低值者(数值<5),HCV-RNA阳性的只有2例(4.9%)，发光强度高值者中(数值>5),HCV-RNA阳性有21例(24.75%)。见表1。

讨论

丙型肝炎具有较高的可变性和显著的异质性，不同菌株的核苷酸和氨基酸序列存在显著差异[6]。丙型肝炎的发病主要是由HCV感染人体所造成。大多数早期丙型肝炎患者没有明显的临床症状，可能发展为慢性丙型肝炎。不了解自己疾病的患者会延迟疾病的治疗，并可能传播给他人。因此，对丙肝的早期诊断有助于控制疾病并防止疾病的传播[7]。目前血清学检测和分子生物学检测是丙肝病毒感染的主要检测手段，很多医院还在沿用ELISA方法检测。然而，由于HCV基因序列的高变异性，灰色区域结果的可靠性较差，ELISA试剂是筛选试剂，可能产生假阳性和假阴性[8-9]。人们发现，化学发光法测定原理与ELISA相似，检测灵敏度高，操作简便，标记物多，保质期长，无放射性污染[10]。化学发光免疫测定以发光剂为酶的标志物，其纯度、质量、活性和亲和力决定了免疫酶试验的成功[11-12]。同时丙肝有很多隐性感染的情况，患者HCV感染后有10%～40%会自发清除。由于部分经过治疗或者患者自愈后病毒复制减慢或停止，血清中的拷贝数低于最低检出值，而丙肝抗体在体内存在时间长，故可出现丙肝抗体阳性而HCV-RNA阴性情况。尤其在抗体检测的数值较低的阳性值范围内。另外，对于丙肝抗体的确证试验NAT、RIBA，开展的医院很少，如果只是为了确认有没有丙肝抗体会过于费时费力。因为对于一般为了进行有创检查的筛查患者，没有输血史、手术史或者丙肝患者密切接触史，并非丙肝的针对性检查，其抗体浓度的高低，尤其是HCV-RNA阴性患者，对其丙肝抗体数值具体多少，是否需要进行丙肝抗体的确证试验(NAT、RIBA)就显得有些得不偿失了。我们结合HCV-RNA的复制量来判断其是否现正丙肝感染，是否有传染性，是否需要治疗会更有价值。《丙型肝炎防治指南(2015年更新版)》中明确指出HCV核酸阳性是丙肝的确诊依据，丙肝确诊病例应进行抗病毒治疗。HCV-RNA是HCV核心部分，是HCV复制有传染性的直接证据。此次研究中心，我院和大部分综合医院一样，丙肝筛查主要应用于在有创检查前进行感染性疾病筛查患者，并非可疑丙肝感染者，单纯纠结丙肝抗体是否真阳性反而容易忽视患者是否现症感染而耽误其他疾病的诊疗。从实验数据我们也可以看出，在发光强度低值的41例丙肝抗体阳性中，只有2例HCV-RNA阳性，高值的85例中HCV-RNA阳性也仅仅有21例。另外，我们在临床上经常会遇到患者在一家医院检测丙肝抗体弱阳性、HCV-RNA阴性，又来其他医院用其他厂家或者型号机器复检丙肝抗体进行比较的情况。在医学检验领域，由于目前检测手段的局限性，丙肝抗体弱阳性标本在不同仪器中比较，一致性并不是特别理想。究竟是假阳性，还是不同原理的仪器检测窗口期不同，均存在一定争议。所以建议临床医生对于丙肝抗体阳性，尤其是数值较低的弱阳性，在进行下一步诊疗前参考HCV-RNA的情况，不宜对丙肝抗体滴度进行过度关注或重复检测等造成不必要的人力、物力的浪费。

参考文献

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