O-P液的采取及人员防护措施

聂翠凤 刘建功 吕春/ 内蒙古巴彦淖尔市杭锦后旗畜牧局

咽部分泌物的缩写，是用于病原检测的样品。

牛羊O-P 液的采集是开展动物口蹄疫病原学监测的一项重要技术内容，O-P 液采集主要适用于牛、羊、猪体型大的偶蹄类动物。动物采集食道－咽部分泌物（O － P 液），可以评估家畜免疫抗体水平，掌握群体免疫状况；了解口蹄疫病原的分布状况及高风险区域的发病情况，追踪口蹄疫病毒变异趋势。

采集技术需要在充分理解的基础上进行操作，通过实际操作发现问题，及时解决问题。切实掌握O-P液采集技术，为以后顺利完成重大动物疫病防控过程中的样品采集工作打下基础。O-P 液采集前需要掌握的知识有保存液的配制，采样工具准备、采集方法、采集时注意事项及采集后样品的保存。

（一）O-P 液的采取

1. 配置试剂。

（1）所需试剂的配制10.1 mol/LPBS 液：氯化钠80 g，氯化钾2.0 g，磷酸氢二钠30.0 g，磷酸二氢钾2.0g，蒸馏水1000.0 ml ；0.04 mol/L、pH7.4 磷酸盐缓冲液: 0.1 mol/LPBS 液400ml， 蒸馏水600 ml。

（2）所需试剂的配制0.5% 水解乳蛋白/Earle’液: 氯化钠6.8 g，氯化钾0.4 g，氯化钙0.2 g，硫酸镁0.2 g，磷酸二氢钠0.14 g，葡萄糖1.0 g，10% 酚红2.0 g， 水解乳蛋白5.0 g，加双蒸馏水1 000.0ml。按配方称取各成分并逐个溶解，最后加双蒸馏水1 000 ml，过滤除菌，或69 kpa 高压蒸汽灭菌15 min，室温或4℃保存。

2. 采样所需器材。金属探杯、灭菌广口瓶（或20 ml 大离心管）、采样箱、记号笔、标签、封口膜、一次性手套、口罩。

3. 采样所需试剂。生理盐水、0.2% 柠檬酸或2％氢氧化钠、细胞培养液（0.5% 水解乳蛋白-Earle液）或磷酸盐缓冲液（0.04 mol/l 、pH7.4）。

4. 样品采集方法。采样时动物呈站立保定，将探杯随吞咽动作送入食道上部10 ～ 15 cm 处，轻轻来回拉动2 ～ 3 次，然后将探杯拉出。如采集的O-P 液被反刍胃内容物严重污染，要用生理盐水或自来水冲洗口腔后重新采样。

5．样品保存。将探杯采集到的4 ～ 6 ml O-P 液倒入20 ml 以上的灭菌玻璃容器或离心管中， 容器中应事先加有4 ～ 6 ml 细胞培养液（0.5% 水解乳蛋白-Earle 液）或磷酸盐缓冲液（0.04 mol/L、pH7.4），加盖密封后充分摇匀，贴上防水标签，并写明样品编号、采集地点、动物种类、时间等，尽快放入装有冰块的冷藏箱内，然后转往-20℃冰箱冻存。通过病原检测，做出追溯性诊断。

6．样品采集时注意事项。

（1）动物站立保定，充分保定后方可采样品，防止刮伤动物食道。

（2）被检动物在采样前禁食（可饮少量水）12 h，以免胃内容物反流污染O-P 液。

（3）采样探杯在使用前需要在0.2% 柠檬酸或1% ～ 2% 氢氧化钠溶液的塑料桶中浸泡5 min，再用与动物体温一致的清水冲洗探杯后使用。

（4）每采完一头动物，探杯要重新进行消毒并充分冲洗。防止相互产生感染。

（二）采样人员的防护注意事项

1．要使用合格的防护用品（合格的医用防护用品）。

2．要反复不断的对工作人员进行安全防护技术培训，提高安全防护意识，养成良好的防护习惯。

3．要定期对工作人员进行健康体检，早发现，早治疗，做到防患于未然，减少感染几率。

4．从工作人员进入现场抓牛、采样、登记、运送样品等一系列操作及监测阳性畜的隔离、集中，阳性畜的运送，等过程要无害化处理。

5．穿戴防护用品。穿戴个人防护用品要按实验室的要求、顺序进行。穿戴顺序首先戴口罩、防护眼镜、戴防护帽、第一层手套，然后穿防护服或工作服，最后穿鞋套或胶鞋，戴第二层手套并将手套套在防护服袖口外面。卸载顺序，摘下外层手套、摘下防护眼镜、脱掉防护服、摘掉防护帽、脱掉鞋套或胶鞋、摘下口罩、摘下内层手套。防护服、口罩、防护眼罩、防护帽、脚套、手套（两层）等一次性防护用品使用后要集中销毁，可以重复使用的要经过灭菌后再使用。

6．避免手套的触摸“污染”，工作中戴手套的手避免触摸鼻子、面部，揉眼睛。

7．严禁在工作场地吃东西，抽烟，喝水，化妆，打手机等，与工作无关的操作。

8．接触所有可能污染的东西时，一定要戴手套。