纸片法与沙氏培养法对真菌敏感性的研究

杨光建

云南省边防总队医院检验科，云南昆明 650101

[摘要] 目的 探讨中西药联合治疗真菌感染的临床效果。方法 氟康唑、酮康唑以及制霉菌素应用纸片法，苦参、黄芪以及黄连应用沙氏培养法分别对念珠菌45株进行药敏测验，并分析实验结果。结果 氟康唑、酮康唑、制霉菌素对45种念珠菌抑菌作用中，高敏感菌株数量分别为40、38、22株，苦参、黄芪以及黄连沙氏基对45种念珠菌抑菌试验中黄连抑菌效果最好，分别为26.67%、0、100%，联合药敏试验结果显示黄连及酮康唑之间协同作用比较明显。结论 中西药联合抑制真菌，效果良好，值得在临床推广和应用。

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关键词 ] 真菌感染；中西药联合；治疗

[中图分类号] R33　　　[文献标识码] A　　　[文章编号] 1672-5654（2014）07（c）-0185-02

随着科技的进步与发展，真菌感染的情况越来越多。其中患者免疫力低下，或者抗真菌药物、免疫抑制剂、肾上腺皮质激素的滥用，加之各种侵入性操作的开展，是引发致病性真菌感染率升高的主要原因，若不采取积极有效的措施进行处理，极易导致患者病情的恶化甚至引发死亡[1]。本次试验就2009—2012年期间的药敏试验进行回顾分析，取得了一定的成果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 试验材料

本次试验材料主要包括以下几种[2]：①试验念珠菌株包括：①白色念珠菌35株，高里氏念珠菌3株，热带及伪热带念珠菌6株，类星型念珠菌1株，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心；②氟康唑（由扬子江药业集团有限公司生产，规格50 mg×6s）、酮康唑（由西安杨森制药有限公司生产，规格0.2g×6s）、制霉菌素（由山东鲁抗医药股份有限公司生产，规格25万单位），药敏纸（由上海宝曼生物科技有限公司生产，含量99%），采用直接浸泡法制成含药纸片（每片药物含量50 μg），在37℃烘干后，在4~10℃条件下进行保存；③中药液，黄连、黄芪及苦参（均购自亳州市自然泰食品经营部）均称取100 g，加入自来水进行浸泡，持续12 h，将中药熬煮并浓缩成200 mL，制成生药液，含量0.5 g/mL，并进行高压灭菌处理，15磅持续20 min；④培养基制作，严格按照全国标准操作规程中沙氏培养基制作方法制作中药培养基[3]，其中蒸馏水应用含有一定浓度有效成分的中药液代替。

1.2 试验方法

应用游标卡尺分别对3种西药的45株念珠菌抑菌环进行测量，耐药抑菌环标准为6~10 mm直径，中度敏感抑菌环直径为11~20 mm，敏感抑菌环直径为21 mm[4]。

1.2.1应用纸片法进行西药药敏试验 用无菌棉签将念珠菌液（2.0麦氏单位）在沙氏培养基上均匀涂抹，将含有西药的纸片贴在培养基上，在28℃条件下进行培养，时间持续24 h，应用游标卡尺对抑菌环直径进行测量。

1.2.2中药药敏试验 将按照2.1方法制作的中药沙氏培养基分别制成平板状，用无菌棉签将念珠菌液（2.0麦氏单位）在沙氏培养基上均匀涂抹，在28℃条件下进行培养，时间持续24 h，然后对念珠菌的生长状况进行观察。

1.3联合药敏试验

选择按照上述方法制作的黄连沙氏培养基，将念珠菌液（含量2.0麦氏单位）均匀涂抹，将3种西药纸片分别贴在培养基上，在28℃条件下进行培养，时间持续24 h，应用游标卡尺对抑菌环直径进行测量。

1.4诊断标准与培养鉴定

所取得的血液、体液以及相关引流物，均采取培养、镜检、试验。诊断标准：由国家所属的医疗监控小组进行诊断标准的制定[5]。被检验液体中，一旦出现一种连续送检 3从以上的，均视为病菌分离出，则判定抗真菌治疗的效果。*表示没有抑菌作用，念珠菌生长状况良好；**表示抑菌作用部分有效，念珠菌生长受到一定限制；***表示抑菌作用良好，念珠菌完全不生长。

1.5 统计学处理

采用spss统计学软件对数据进行统计学处理，其中计数资料采用检验，计量资料应用检验，<0.05，数据差异具有统计学意义。

2 结果

2.1西药抑菌作用

对比三种西药抑菌效果，氟康唑敏感菌株40株，高于酮康唑的38株及制霉菌素的22株，说明氟康唑抑菌效果最好，详见表1。

2.2中药抑菌作用

分别对3种中药的45株念珠菌的抑菌作用进行测量，试验用中药液有效成分浓度为0.5g/mL。黄连沙氏培养基敏感菌株45株，明显高于苦参及黄连沙氏培养基的12株及0株，说明黄连对于念珠菌的抑制效果优于黄连及苦参。详见表2。

2.3测量黄连抑菌浓度最低值

在45株念珠菌中选择32株，对黄连抑菌浓度最低值进行测量，详见表3。结果显示不同黄连浓度沙氏培养基上抑菌浓度最低值不同，抑菌浓度最低值1:8及1:16的念珠菌株分别为6株、8株，抑菌浓度最低值1:32的念珠菌株19例，而在抑菌浓度为1:50及1:64的沙氏培养基上，32株念珠菌均能生长，选择1:50作为联合药敏试验沙氏培养基中药浓度。

2.4 联合药敏试验

联合药敏试验显示，黄连仅对酮康唑抑菌环具有扩大作用，扩大效应最明显的是伪热带念珠菌，选择白色念珠菌26株、伪热带念珠菌2株、热带念珠菌4株，进行联合药敏试验。其中，白色念珠菌联合药敏试验中，中西药联合应用同单纯应用酮康唑抑菌环进行比较，联合应用抑菌环比较大，直径超过8 mm10株，超过4 mm12株，小于4 mm3株，抑菌环缩小者1株，说明中西药对约67%的白色念珠菌协同作用比较明显，详见表4。

3讨论

近年来，随着临床真菌感染率的不断增加，感染病原菌除了常见真菌种类外，部分罕见真菌也时有媒体关注。针对日趋严重的真菌感染，抗真菌药物研究逐渐成为医学领域的研究热点。临床治疗真菌感染药物可分为中药、西药以及中西联合药物三种，常用西药种类丰富，多烯类药物如制霉菌素等；三唑类药物如氟康唑等；常用中药多样、成分复杂，主要包括单味中药剂中药有效活性成分两大类[6]，如牡丹皮、野菊花、黄柏等单味中药，丁香酚、小檗碱、黄芩苷等有效成分均具有抗真菌作用[7]，而中西联合药物机剂型众多，疗效良好，如栓剂，洗剂等。这些药物应用于临床，抑菌效果不一，可能与患者病情严重程度、病原菌情况以及药物作用环境、药物贮存条件等有关。临床应用抗真菌药物时，应注意推广药敏试验，避免抗真菌药物滥用，这主要是因为临床常用抗真菌药物普遍价格较高，而且存在一定的不良反应发生率。滥用抗真菌药物，不仅容易提高治疗难度，增加真菌耐药菌株发生率，加重患者经济负担，还能从一定程度上提高临床抗真菌药物不良反应发生率。本次研究应用的抗真菌药物对念珠菌并没有完全的抑制作用，尤其是临床抗真菌治疗效果较好的氟康唑也是如此。本次试验中，氟康唑的耐药菌株3株，约占6.67%。

需要注意的是，当两种或两种以上中药联合应用治疗真菌感染时，协同作用比较明显。本次研究提示，将属于中药的黄连与属于西药的酮康唑联合应用治疗念珠菌感染协同作用比较明显，但治疗其他真菌感染时是否具有协同作用需要进一步研究及探讨。本文研究结果与陆红研究结果存在明显的一致性[8]，证明研究的真实可信性。与其相比，本文突出分析了黄连浓度、西药联合应用的药敏结果，为后期临床工作的研究开展提供参考。

总之，采用中西药治疗真菌，可显著提高治疗效果，避免滥用抗真菌药物，促进临床抗真菌药物合理应用。

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参考文献]

[1] 罗振华，王和.343株致病性念珠菌的基因鉴定及药物敏感性检测[J]．山东医药，2012，52(27):33-36．

[2] 刘永芳，张浩，陈金文，等.医院感染念珠菌菌种分布及耐药情况分析[J].中国抗生素杂志，2013,38（6）：473-475，后插3页.

[3] 谭雪峰，张秀芳，柴杰，等.临床念珠菌感染的分布及药敏结果分析纸[J]．检验医学与临床，2013,10(4):444-445．

[4] 陶建萍.4年1779株白色念珠菌检出率及药敏耐药率分析[J]．中国保健杂志，2013（6):404-405．

[5] 余进，李若瑜，朱德姝，等．念珠菌的病原流行病学和实验室检测[J]．中国感染与化疗杂志,2011,11(2)：96-97.

[6] 王亚茹.抗真菌药物研究进展[J].黑龙江医药,2013,3(26):482-483.

[7] 王刚生，邓洁华，马耀辉，等.3种中药单体成分对肺念珠菌的抗菌活性[J].中华肿瘤防治杂志,2013,20(6):41-43.

[8] 陆红．念珠菌的临床感染及耐药性研究[D]．温州：温州医学院:2009．

（收稿日期：2014-04-30）