食品中单核细胞增生性李斯特氏菌耐药性与分子分型研究

逯 岩

辽宁省抚顺市疾病预防控制中心，辽宁抚顺 113006

[摘要] 目的 了解单核细胞增生性李斯特氏菌（L．monocytogenes LM）的耐药性质以及分子分型的具体特点，探讨耐药表型与PFGE基因组型之间所具备哪些关联。方法 采取自2011—2013年期间我市各区的熟食、牲畜肉类、以及海鲜水产品等食品中采取80株LM,采用微量肉汤稀释法观察抗生素的敏感性。结果 发现16.25％（13/80）的菌株存在耐药。结论 在所选取的LM存在一定的耐药性,LM的PFGE分型与其药敏分型无对应关系。

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关键词 ] 单核细胞增生性；李斯特氏菌；耐药性；分子分型

[中图分类号] R852　　　[文献标识码] A　　　[文章编号] 1672-5654（2014）07（c）-0031-02

1 资料与方法

1.1 一般资料

在2011年3月—2013年3月期间，主要采用我市的熟食、牲畜生肉类、速冻海鲜水产品，以及各个类型的凉拌菜作为主要研究对象，在选取的食品中采取80株LM,具体食物来源渠道详见表1。

1.2 研究方法

1.2.1微量肉汤稀释法 通过采用微量肉汤稀释法观察抗生素的敏感性,同时采用PFGE进行分子分型。[1]按照美国公司临床试验标准推荐的LM药敏试验原则，并相应结合临床使用药物数量共计选择15种抗生素，推荐使用美国Bio-Rad公司的脉冲场电泳仪仪器，同时采用微量肉汤稀释法进行试验，详细操作步骤需要按照说明书严格执行。

1.2.2 PFGE分型方法 PFGE分型方法需要按照教育期刊网 http://www.jyqkw.com
参考文献执行。[1]耐药谱与PFGE型别关系的分析：对菌株的每种耐药谱分别统计其对应的PFGE型别数目，分析比较两者之间的关系。

1.2.3结果判定标准 统计软件：BioNumerics分析软件；版本：7.1；PFGE图谱采用软件BioNumerics进行分析处理，选用Nice-UPGMA方法进行分析，同源性为100%的为同一PFGE型，小于100%为不同的PFGE型。耐药结果参照CLST药敏标准进行结果判定，同时可以采用Excel 2003软件进行数据的录入以及对其分析。

2 结果

单增李斯特菌的耐药谱分步以及与PFGE型别的对应关系，见表2。

通过对实验中的抗生素敏感试验结果，所选取的80株LM中存在15种耐药，通过试验观察，LM对于亚胺培南的耐受性最差，中介率也比较高，其他抗生素均为敏感级别1。其中发现16.25％（13/80）的菌株存在耐药：业胺培南的耐药率最高（12.50％,10/80）,其次是四环素和强力霉素（3.75％,3/80；2.50％,2/80）。耐药分型可将80株菌分为9个型别.PFGE将80株菌分为34个带型,以17型和29型为主。A型耐药谱分布范围较广,出现在79.41％ （27/34）的PFGE型别中。

3 讨论

当代社会中，抗生素在临床以及畜牧业的使用逐渐导致食品中的致病菌出现多发状态，同时也对食品安全产生了巨大的威胁和危机[2]。本次通过2011—2013年LM对15种抗生素的平均耐药率为16.20%，高于全国平均水平，意味着我市食品中LM的耐药性问题较为严重。

在细菌基因分型中，PFGE无疑是“金标准”，不仅能够对菌株间的亲缘关系进行判断，而且可以对传播途径、爆发来源等进行探寻。本次研究将80株单增李斯特菌分为44个不同的PFGE型别，Neves等人通过相同的方式将80株单增李斯特菌分为33个不同的PFGE型别；何冬梅等人通过相同的方式将107株单增李斯特菌分为41个不同的PFGE型别。不同研究在分型方面的差异可能与菌株数量、地区来源、食物来源等方面的不同有关。

细菌分型分为表型分型和基因分型两种，其中，表型分型容易在环境因素的影响下出现性状表达改变的问题，进而影响分型结果，所以细菌分型更加倾向于基因分型方法[3] 。从本次研究所得结果可以看出，PFGE的分型能力大于耐药的分型能力，这一结论与国内其它研究资料中的“PFGE具有高分辨力”的结论高度一致[4]。

综上所述，细菌耐药性检测对于耐药菌产生、传播的预防与控制具有重要意义，同时也能够发挥出指导临床用药的积极作用。在实际操作中，应注意将PFGE分型与耐药分型结合使用，以便为细菌性传染性疾病的预防和控制提供更多依据。

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参考文献]

[1] 贾静，毕振旺，陈玉贞，等.山东省食品中单核细胞增生李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型[J].山东大学学报:医学版,2011（8）：153-156.

[2] 刘书花，魏云波，林小静，等.食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测方法研究进展[J].现代农业科技，2010（19）：327-328.

[3] 刘书花，李福伟，李剑，等.食品中单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法的建立[J].现代农业科技，2010（22）：352-353.

[4] 李波，乔凤，方丽，等. PCR方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌[J].吉林大学学报(医学版)，2006（1）：154-156.

[5] 胡晓虹.食品李斯特菌污染检测方法研究[J].按摩与康复医学，2011（36）.

[6] 江迎鸿，陈亚波，李向丽，等.多重PCR方法检测食品中霍乱弧菌、副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特氏菌[J].广东农业科学，2011（10）：135-135，150.

（收稿日期：2014-04-29）

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