枇杷内生真菌对P3.9生防木霉菌株的抑菌作用

　　摘要:将健康枇杷(Eriobotrya japonica)根、主干、枝条、叶和果实内分离的96株内生真菌与抗枇杷根腐病病菌的P3.9生防木霉(Trichoderma spp.)菌株进行对峙培养,分析P3.9生防木霉菌株与枇杷内生真菌之间的拮抗关系。结果表明,90株枇杷内生真菌对该木霉菌株无抑制作用,其余6株(DPG2、DPG6、DPZG15、DPZT12、DPZT20和PGSC5)对其有一定抑制作用。枇杷各个器官中的内生真菌对P3.9生防木霉菌株无抑制作用的占93.8%,有一定抑制作用的仅占6.2%,而且对其抑制率均在50%以下。说明此菌株有望在枇杷各器官中成功定殖,从而有效控制枇杷根腐病病菌。

　　关键词:木霉(Trichoderma);内生真菌;拮抗作用;枇杷根腐病

　　中图分类号:S667.3文献标识码:A文章编号:0439-8114(2014)11-2547-04

　　Antifungal Activity of Endophytic Fungi from Loquat to Trichoderma sp. (P3.9) Strain

　　LU Hai-ju1a,ZHANG jian-chun1b,SHEN yun-mei1a,YANG mei1a,ZHENG Xiao-lan2

　　(1a.College of Life Science and Technology; 1b. College of Foreign Languages, Honghe College, Mengzi 661199,Yunnan,China;

　　2. Environment and Plant Protection Institute, CATAS, Danzhou 571737,Hainan,China)

　　Abstract: To establish basis of colonization of the Trichoderma sp. Strain P3.9 in all organs loquat, the P3.9 was tested by plat-confront method with 96 strains of loquat Endophytic fungus. The results showed that the 90 strains didn’t inhibited to p3.9. Although the other 6 strains have some inhibition,the inhibition rates were less than 50%. Loquat Endophytic fungus which didn’t control P3.9 amounts to 93.8% and the rate of other fungi was only 6.2%. P3.9 could colonize in all organs loquat to control loquat root. It will provide strain resources for bio-control of this disease.

　　Key words: Trichoderma; endophytic fungus; antifungal activity; loquat root rot disease

　　基金项目:红河学院博硕项目(XJ1B0912);科技部基础工作项目(2006FY120100);云南省高校“农作物优质高效栽培与安全控制重点实验室”建设经费资助项目;红河学院硕士点植物保护一级学科建设项目

　　木霉(Trichoderma)是一种重要的生防菌株,至少对18个属29种病原真菌表现出一定的拮抗作用[1],其防病机制主要包括竞争、重寄生、抗生、诱导抗性及协同拮抗[2]。木霉制剂在防治豇豆幼苗枯萎病[3],棉花黄萎病[4],辣椒疫病、立枯病、白绢病[5], 西瓜枯萎病[6],番茄褐斑病[7],水稻纹枯病、稻瘟病、稻曲病[8],地黄枯萎病[9]等的过程中,取得了一定成效,特别对植物土传真菌病害防治效果好。木霉有对人畜无毒、无农药残留、不污染环境[10]等优点。

　　枇杷(Eriobotrya japonica)根腐病是一种危害较严重的土传真菌病害,化学农药防治无明显效果,而木霉生物防治是植物土传病害控制中应用较为广泛的方法之一。本研究中,P3.9生防木霉菌株分离自枇杷主干韧皮部,此菌株为内生真菌,具有内生真菌作为生防菌特有的优势,即专一性强、可人工接种导入不同的植物并通过宿主的种子进行传代[11]。同时,其对枇杷根腐病病菌有很高的抑制效果,室内抑制率达80%以上。植物内生真菌具有普遍存在性和生物多样性[12]的特点,枇杷内还存在除木霉以外的其他内生真菌。P3.9生防木霉菌株能否在与其他内生真菌营养及空间竞争中获胜,是此木霉成功定殖的关键因素之一。因此,本试验采用对峙培养法,研究P3.9生防木霉菌株与其他内生真菌的拮抗关系,从理论上判断P3.9生防木霉菌株能否在营养及空间竞争中获胜。为其有效防治枇杷根腐病提供一定的理论依据及菌种资源。

　　1材料与方法

　　1.1材料

　　1.1.1枇杷内生真菌及P3.9生防木霉菌株从蒙自枇杷园区采集枇杷根、主干、枝条、叶片和果实,常规组织分离[13]获得供试菌株。

　　1.1.2供试培养基PDA培养基(马铃薯200 g、葡萄糖16 g、琼脂20 g、去离子水1 000 mL)。

　　1.2方法

　　1.2.1对峙培养将已分离纯化的木霉和供试菌株(枇杷内生真菌)接种于PDA培养基中,28 ℃恒温扩大培养4 d。采用对峙培养法[14],在培养基同一半径周围用打孔器取直径为5 mm的菌丝块,同时接种于无菌PDA平板(直径90 mm)中,两接种点相距40 mm,以不接种供试菌株的作为对照,设3次重复,在28 ℃下恒温培养,3 d后测定木霉菌落直径,计算其生长抑制率。抑制率=[(dCK-dB)/dCK]×100%,式中,dCK表示对照木霉菌落直径,dB表示处理木霉菌落直径。

　　1.2.2数据统计数据均采用SPSS 19.0统计软件进行统计,计算处理间的差异显著性。

　　2 结果与分析

　　2.1P3.9生防木霉菌株与枇杷根部内生真菌之间的拮抗关系

　　P3.9生防木霉菌株与枇杷根部内生真菌之间的拮抗关系见表1。由表1可知,4株1年生枇杷根部内生真菌和6株多年生枇杷根部内生真菌菌株与P3.9生防木霉菌株对峙培养3 d后,与多年生DPG2和DPG6菌株培养的木霉菌落生长直径与对照直径差异极显著,其他菌株差异不显著。表明DPG2和DPG6这2个菌株对此木霉有抑制作用,抑制率分别为26%和22%,其他菌株对其无抑制。

　　2.2P3.9生防木霉菌株与枇杷主干内生真菌之间的拮抗关系

　　P3.9生防木霉菌株与枇杷主干内生真菌之间的拮抗关系见表2。由表2可知,4株一年生枇杷主干内生真菌和21株多年生枇杷主干内生真菌菌株与P3.9生防木霉菌株对峙培养3 d后,与多年生DPZG15菌株对峙培养的木霉菌落生长直径与对照直径差异极显著,其他菌株差异不显著。表明DPZG15菌株对此木霉有抑制作用,抑制率为30%,其他菌株对其无抑制作用。

　　2.3P3.9生防木霉菌株与枇杷枝条内生真菌之间的拮抗关系

　　P3.9生防木霉菌株与枇杷枝条内生真菌之间的拮抗关系见表3。由表3可知,20株多年生枇杷枝条内生真菌与P3.9生防木霉菌株对峙培养3 d后,与PZT12和PZT20菌株对峙培养的木霉菌落生长直径与对照直径差异极显著,其他菌株差异不显著。表明PZT12和PZT20这2个菌株对此木霉有抑制作用,抑制率分别为48%和41%,其他菌株对其无抑制作用。