6—BA对大豆愈伤组织诱导影响的初步研究

　　中图分类号：Q813.1文献标识码：A文章编号：0439-8114（2013）16-3999-03

　　大豆（Glycinemax）属于蝶形花科大豆属，别名黄豆，是古老的栽培作物之一，至今大约有四、五千年的种植历史。我国不仅种植大豆历史悠久，而且是栽培大豆的起源地，世界上其他国家的大豆大多是直接或间接从我国传播出去的。大豆的组织培养研究始于20世纪60年代，但各种外植体的组织培养与再生植株都十分困难。直到80年代中后期，大豆的组织培养工作才有了突破性的进展，大豆的组织培养常用外植体包括真叶、下胚轴、子叶、子叶节、胚轴和胚等[1-9]。近年来，也有报道可以通过胚尖诱导形成再生植株[10-12]，但多数再生体系再生频率低、重复性差，而愈伤组织再生体系与直接再生体系相比具有重复性好、出芽率高等特点。然而迄今为止，通过大豆愈伤组织途径获得再生植株的报道较少。本研究探讨不同浓度的6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）对愈伤组织诱导的影响，筛选出愈伤组织诱导的最佳培养基，进而能建立一个高效的大豆愈伤组织遗传转化受体系统。

　　1材料与方法

　　1.1材料

　　大豆种子吉农21由吉林农业大学生物技术中心提供。

　　1.2方法

　　1.2.1种子的萌发选取饱满成熟的大豆吉农21的种子，用体积分数为70%的乙醇消毒30s，再用质量分数为0.1%的升汞溶液消毒10min，用无菌水冲洗3～5次后接种到MS基本培养基上，温度（25±2）℃，光照度2000lx条件下进行培养。

　　1.2.2愈伤组织的诱导以培养7d后的无菌实生苗的胚轴、子叶、子叶节、胚根为外植体，分别接种于不同愈伤组织诱导的培养基中，放入黑暗条件下进行培养，20d后统计其愈伤组织诱导情况。愈伤组织诱导培养基分别为A培养基：MS+1.0mg/LIAA+1.0mg/L6-BA；B培养基：MS+1.0mg/LIAA+2.0mg/L6-BA；C培养基：MS+1.0mg/LIAA+3.0mg/L6-BA。

　　2结果与分析

　　2.1大豆胚轴愈伤组织的诱导

　　取培养7d后的无菌苗的胚轴为外植体，分别接种到A、B、C3种培养基上，黑暗条件下培养20d（表1）。从表1中可以看出，对于胚轴来说，A培养基的诱导效果最好，愈伤组织诱导率达到98.1%，并且形成的愈伤组织颜色呈淡黄色，比较致密，状态良好（图1），而其他两种培养基上形成的愈伤组织褐化很多，可能是因为6-BA浓度过高引起的。

　　2.2大豆子叶愈伤组织的诱导

　　取培养7d后的无菌苗的子叶为外植体，分别接种到A、B、C3种培养基上，黑暗条件下培养20d（表2）。从表2中可以看出，对于子叶来说，A培养基的诱导效果最好，愈伤组织诱导率可以达到100.0%，并且形成的愈伤组织颜色呈淡黄色，比较致密，状态良好（图2）。

　　2.3大豆子叶节愈伤组织的诱导

　　取培养7d后的无菌苗的子叶节为外植体，分别接种到A、B、C3种培养基上，黑暗条件下培养20d（表3）。从表3中可以看出来，对于子叶节来说，A培养基的诱导效果最好，愈伤组织诱导率可以达到97.4%，形成的愈伤组织颜色呈淡黄色，比较致密，状态良好（图3）。其他两种培养基较A培养基形成的愈伤组织褐化增多，愈伤组织的生长受到阻碍。

　　2.4大豆胚根愈伤组织的诱导

　　取培养7d后的无菌苗的胚根为外植体，分别接种到A、B、C3种培养基上，黑暗条件下培养20d（表4）。从表4中可以看出，对于胚根来说，A培养基的诱导效果最好，愈伤组织诱导率可以达到68.2%，形成的愈伤组织颜色呈淡黄色，比较致密，状态良好（图4）。其他两种培养基较A培养基形成的愈伤组织数目明显减少，褐化严重，愈伤组织的生长受到严重阻碍，可能由于根部对于细胞分裂素浓度更为敏感所致，高浓度的细胞分裂素抑制了根部愈伤组织的形成。