谈如何采用高效液相色谱测定药物中阿莫西林含量

　　摘要：目的：通过采用高效的液相色谱测定方法，对药物中阿莫西林含量进行了深入的研究分析，以此来建立起高效液相色谱测定药物中阿莫西林含量方法。具体内容，主要是利用了高效液相色谱测定系统，并将流速、流动相、乙腈等含量成分进行了严格的控制，与此同时，还需要将柱温保持在合适的温度以内，以此来保证测定结果的精确性。结论：笔者通过结合自身多年的工作经验，针对如何采用高效液相色谱测定药物中阿莫西林含量进行了讨论阐述，得出以下相关结论，以供参考。

　　关键词：高效液相色谱测定方法；阿莫西林含量；试验

　　1概述

　　众所周知，阿莫西林是一种较为常见的内酰胺类抗生素，这类药物具有很强的杀菌性，能够非常快速的穿透细胞膜，是当前我国应用最为广泛的青霉素药品之一。而在新药的研制过程中，药代动力学是非常至关重要的组成部分。但是，我国现如今对于阿莫西林的药代动力学的研究较少，至今仍没有建立起相对完善的含量分析体系，这就对日后的阿莫西林研究工作造成了极大的不便。因此，就对如何采用高效液相色谱测定药物中阿莫西林含量进行了探讨分析，从而得出一些自身的观点。

　　2材料和方法

　　2.1仪器与试剂

　　Agillent1100高效液相色谱仪，包括G1379A脱气机，G1311A四元泵，G1313A自动进样器，G1316A柱温箱，G1315ADAD检测器，A.10.02色谱工作站。阿莫西林标准品，批号K0220703，含量86.8%，中国兽医药品监察所提供。乙腈，色谱纯；其他试剂均为分析纯；超纯水。

　　2.2色谱条件色谱柱

　　ZORBAXSBC（4.6mmx150mm，5.0xIm）；流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾-0.1mol/L三乙胺-乙腈（800：120：7），用磷酸调pH至2.5；流速1.0mL/min；柱温30℃；检测波长220nm。

　　2.3标准溶液的制备、稀释和含药标准血浆的配制

　　将阿莫西林的标准品进行准确的称取，利用纯水来对其进行溶解和稀释，并得出相应的配制浓度的储备液。而通常情况下，如果是采用了倍数的稀释方法，最终将会稀释成七中不同的浓度标准体系。这样就需要取七分测定药物，并将这些药物分别加入到各个工作溶液中，以此来对高效液相色谱测定药物中阿莫西林的含量进行具体的划分。

　　2.4首先，实验人员需要在高效液相色谱测定药物中加入适量的阿莫西林标准溶液，并将其配置浓度进行严格的控制，具体分为高、中、低三种含有浓度的药物样品，并将这些样品按照相应的处理方法进行全面的测定。并且，在这一试验过程中，实验人员必须保证每一种的浓度配制都需要进行三次以上的重复调配，从而计算出最终准确的样品回收率与变异系数。

　　2.5按照规定方法配制系列浓度阿莫西林标准血浆，同时将待测未知血浆样品补加100ml蒸馏水，各标准血浆和样品血浆管中分别另加100ml的高氯酸溶液，置旋涡震荡器上震荡40s，然后高速冷冻离心（15000r/min，15min，4cc）。取上清液50ml注入色谱系统进行分析。以测得的阿莫西林峰面积为纵坐标，相应的阿莫西林浓度为横坐标绘制曲线，计算标准曲线的线性回归方程。

　　2.6用空白血浆加阿莫西林标准溶液，配制成浓度分别为0.5、5.0、20.0ml的低、中、高三种已知浓度的血浆药物样品。

　　3结果

　　3.1阿莫西林的色谱图血浆中阿莫西林与内源性杂质分离好，阿莫西林的保留时间约为12.3min。

　　3.2种浓度的血浆样品的提取回收率为86.1%～98.0%，表明本方法的提取回收率良好，血浆前处理步骤完全能适合血浆中样品的测定。

　　3.3药物中阿莫西林浓度在0.5～20.0mL范围内，峰面积与浓度有良好的线性关系，回归方程为Y=41.912-2.098=0.9997。当S/N=3时，检测限为0.06g/mL。低、中、高三种浓度的药物样品的平均加样回收率分别为100.7%、105.1%、103.3%；变异系数分别为3.0%、0.1%、3.3%。表明本方法可用于药物中阿莫西林含量的测定。

　　4讨论

　　通过在空白的药物中加入阿莫西林标准溶液以后，含有不同浓度的药物样品将会按照上述中处理方法进行一系列的检测，从而记录出完整的色谱图与峰面积。这样一来，实验人员就配比完成的样品溶液越峰面积就行直接的比较，最终得出准确性的回收率。

　　众所周知，阿莫西林这类药物本身具备两性化的特点，很容易在水体中发生溶解，而在乙醇中却是几乎不相溶的状态。然而，由于其普遍处于水溶液的流动环境下，为了保证色谱柱的稳固可靠性，一般都是会在流动相中加入少量的乙腈。但是，随着乙腈使用量的增加，势必会对阿莫西林的出峰时间造成一定的影响。这样一来，药物中原有的阿莫西林的内源性杂质峰将会与林峰之间迅速分离。这时就需要通过对其添加三乙胺成分，以此来形成完整的出峰形状。与此同时，当PH值的流动相达到良好的分离度时，就会从中分离出大量的阿莫林主峰，此时的主峰保留时间一般是1-2分钟。

　　对于药物的变性剂来说，已经有部分研究人员曾经通过利用对甲醇等药剂对血浆中的阿莫西林含量进行了提取，并通过认真仔细的观察以后发现，当药物经过三氯乙酸的提取以后，其色谱图中将会出现一条杂质巨峰，这样就严重干扰了阿莫西林与血浆中其他物质成分的分离。那么，在这种情况下，就很容易出现类似重叠峰的现象。而若是改用了甲醇进行提取的话，阿莫西林的林峰宽度较大，再加之在实际的试验过程中，将会用到大量的甲醇，这就大大降低了阿莫西林含量检测结果的精确性。目前，一些国外医学学者曾经提出要对高效液相色谱测定药物中阿莫西林采用柱切方法、或是反相色谱法来对其含量物质进行测定分析。但是，由于这些方法所使用的仪器设备操作起来十分复杂，并未引起医学界的过度关注。

　　在本文的试验过程中，试验人员通过利用高氯酸溶液来对阿莫西林进行了更好的提取，不仅使其具备了良好的专属性，还大大提高回收率，从而促使生物样品中的药物提取回收率充分满足了规定标准要求。

　　5结论

　　阿莫西林（Amoxicillin）又称羟氨苄青霉素，其化学名称为（2S，5R，6R）-3，3-二甲基-6-[（R）-（-）-2-氨基-2-（对羟基苯基）乙酰氨基]-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-甲酸三水合物，为半合成的耐酸广谱青霉素类抗生素，国内已批准用于治疗猪、牛及家禽的敏感菌感染。

　　本方法测定药物中的阿莫西林专业性强，准确度高。通常认为，在研究药代动力学时，标准曲线的浓度范围要覆盖药代动力学参数C的1/10～1/20，而国内报道猪肌肉注射治疗剂量的C-为17.46～g/ml和12.33～g/ml，故本方法的标准曲线浓度范围（0.50～20.0～g/ml）能够满足猪体内血药浓度测定的要求，可用于相关的药代动力学研究。

　　参考文献

　　[1]曾经泽.生物药物分析第二版[M].北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998.218.

　　[2]朱模忠.兽药手册[M].北京：化学工业出版社，2002.54.

　　[3]肖希龙，胡英杰，高翠华，等.阿莫西林注射用混悬液及其在猪体内的药物动力学研究[J].畜牧兽医学报，2003，34（3）：299-303.