循环血EPCs及FMD与冠状动脉病变的相关性研究
2022-06-09
[摘要] 目的 探讨循环血内皮祖细胞（EPCs）及内皮依赖性血管舒张功能（FMD）与冠状动脉病变严重程度的关系。方法 选择69例冠状动脉造影（CAG）阳性的冠心病患者为CHD组，根据Gensini积分分为低、中、高区间，各区间随机抽样10例分为低分组、中分组和高分组，另选择同期CAG阴性受试者44例为对照组。检测CHD组和对照组外周血EPCs百分比和FMD，低分组、中分组和高分组及对照组随机抽样10例EPCs迁移能力、黏附能力、增殖能力。 结果 CHD组循环EPCs百分比及FMD均较对照组显著降低（P<0.05），经随机在两组抽样， CHD组抽样30例的迁移能力、粘附能力、增殖能力均较对照组抽样显著减弱（P<0.05）。低、中、高分组EPCs百分比、迁移能力、黏附能力、增殖能力及FMD差异均有统计学意义（P<0.05），EPCs百分比、迁移能力、粘附能力、增殖能力及FMD与冠状动脉病变严重程度呈负相关性（r=-0.559，-0.452，-0.464，-0.413，-0.512，P均<0.05）。EPCs百分比、迁移能力、粘附能力、增殖能力均与FMD呈正相关（r=0.452，0.419，0.435，0.395，P均<0.05）。 结论 冠心病患者循环EPCs数量、迁移能力、粘附能力、增殖能力及FMD较非冠状动脉病变者下降，EPCs数量和功能的下降与FMD功能障碍一致，血管内皮功能明显下降与冠状动脉病变严重程度有关。
[关键词] 冠状动脉病变；内皮祖细胞；内皮依赖性血管舒张功能；内皮功能
[中图分类号] R541.4 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）34-0018-04
血管内皮损伤和内皮功能障碍是冠状动脉病变的始动因素，在多种危险因素的共同作用下推动动脉粥样硬化发展，导致冠状动脉狭窄、闭塞引发心肌细胞缺血、缺氧、坏死的心脏病，冠心病是危害人类健康的首要致死病因[1-2]。内皮祖细胞（endothelial progenitor cells ，EPCs）是源自骨髓的多能干细胞，进入循环可最终分化为成熟的血管内皮细胞，研究认为其可参与损伤血管内皮的修复和改善内皮功能，引起研究者的广泛关注[3-4]。而国内对EPCs功能及内皮功能与冠状动脉病变严重程度的关系研究仍较少，本研究针对EPCs数量、功能及内皮依赖性血管舒张功能（flow mediated dilation ，FMD）之间关系进行分析，为临床进一步研究提供参考。
1 资料与方法
1.1 一般资料
CHD组纳入标准：2013年4月～11月在绍兴市中心医院心内科收治诊断为冠心病；年龄≥18岁；行冠状动脉造影（CAG）检查，冠状动脉左主干、左前降支、左回旋支、右冠状动脉至少1支狭窄>50%[5]。对照组纳入标准：同期行CAG为阴性；年龄≥18岁。排除标准：心脑血管事件病史、合并严重心力衰竭、近2个月服用他汀类降脂药物、近3个月外科手术史、内分泌系统疾病、增生性视网膜病变、感染性疾病、凝血功能异常、肝肾功能不全、恶性肿瘤及无法耐受CAG完成检查。CHD组共纳入69例，男48例，女21例，年龄（56.93±8.95）岁，Gensini积分7～41分，依据Gensini积分分为3个区间，低分区间（<15分）、中分区间（15～29分）、高分区间（≥30分）[6]，各区间随机抽样10例分为低分组、中分组和高分组。对照组共纳入44例，男30例，女14例，年龄（54.39±8.73）岁。
1.2循环血EPCs检测[7-8]
EPCs计数：所有受试者于CAG当日清晨空腹抽取外周静脉血，采用CD34、VEGFR-2单克隆抗体标记，采用EPICS ALTRA流式细胞仪检测EPCs占外周百分比。CHD组低分、中分、高分组共30例及对照组随机抽样10例采用Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞，接种培养板加入培养基恒温培养7 d。EPCs迁移能力检测：提取贴壁细胞加血管内皮生长因子加入改良Boyden小室下室，培养6 h，刮去未移动细胞，染色后随机3个×400视野计数迁移细胞；EPCs粘附能力检测：提取贴壁细胞，制成浓度1×109/L悬浊液，加入包被人纤维连接蛋白的培养板进行培养，培养30 min，PBS冲洗未粘附细胞，染色后随机3个×200视野计数贴壁细胞；EPCs增殖能力：提取贴壁细胞，接种包被人纤维连接蛋白的培养板培养，培养4 h，加二甲基亚砜，充分振荡，采用Molecular Devices酶标仪测A490 nm值。
1.3 FMD检测[9]
所有受试者于CAG前1日采用GE LOGIQ9彩色多普勒超声诊断仪检测肱动脉FMD，取仰卧位，采用7.5MHz探头于肘横纹上3～15 cm纵向探测，至少3个心动周期，获取肱动脉最大内径部位，静息状态下内肱动脉内径均数为基础内径（D0），于同一部位连续测量3次取均值；袖带加压后减压测量舒张期肱动脉内径（D1）。FMD=（D1-D0）/D0×100%。
[关键词] 冠状动脉病变；内皮祖细胞；内皮依赖性血管舒张功能；内皮功能
[中图分类号] R541.4 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）34-0018-04
血管内皮损伤和内皮功能障碍是冠状动脉病变的始动因素，在多种危险因素的共同作用下推动动脉粥样硬化发展，导致冠状动脉狭窄、闭塞引发心肌细胞缺血、缺氧、坏死的心脏病，冠心病是危害人类健康的首要致死病因[1-2]。内皮祖细胞（endothelial progenitor cells ，EPCs）是源自骨髓的多能干细胞，进入循环可最终分化为成熟的血管内皮细胞，研究认为其可参与损伤血管内皮的修复和改善内皮功能，引起研究者的广泛关注[3-4]。而国内对EPCs功能及内皮功能与冠状动脉病变严重程度的关系研究仍较少，本研究针对EPCs数量、功能及内皮依赖性血管舒张功能（flow mediated dilation ，FMD）之间关系进行分析，为临床进一步研究提供参考。
1 资料与方法
1.1 一般资料
CHD组纳入标准：2013年4月～11月在绍兴市中心医院心内科收治诊断为冠心病；年龄≥18岁；行冠状动脉造影（CAG）检查，冠状动脉左主干、左前降支、左回旋支、右冠状动脉至少1支狭窄>50%[5]。对照组纳入标准：同期行CAG为阴性；年龄≥18岁。排除标准：心脑血管事件病史、合并严重心力衰竭、近2个月服用他汀类降脂药物、近3个月外科手术史、内分泌系统疾病、增生性视网膜病变、感染性疾病、凝血功能异常、肝肾功能不全、恶性肿瘤及无法耐受CAG完成检查。CHD组共纳入69例，男48例，女21例，年龄（56.93±8.95）岁，Gensini积分7～41分，依据Gensini积分分为3个区间，低分区间（<15分）、中分区间（15～29分）、高分区间（≥30分）[6]，各区间随机抽样10例分为低分组、中分组和高分组。对照组共纳入44例，男30例，女14例，年龄（54.39±8.73）岁。
1.2循环血EPCs检测[7-8]
EPCs计数：所有受试者于CAG当日清晨空腹抽取外周静脉血，采用CD34、VEGFR-2单克隆抗体标记，采用EPICS ALTRA流式细胞仪检测EPCs占外周百分比。CHD组低分、中分、高分组共30例及对照组随机抽样10例采用Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞，接种培养板加入培养基恒温培养7 d。EPCs迁移能力检测：提取贴壁细胞加血管内皮生长因子加入改良Boyden小室下室，培养6 h，刮去未移动细胞，染色后随机3个×400视野计数迁移细胞；EPCs粘附能力检测：提取贴壁细胞，制成浓度1×109/L悬浊液，加入包被人纤维连接蛋白的培养板进行培养，培养30 min，PBS冲洗未粘附细胞，染色后随机3个×200视野计数贴壁细胞；EPCs增殖能力：提取贴壁细胞，接种包被人纤维连接蛋白的培养板培养，培养4 h，加二甲基亚砜，充分振荡，采用Molecular Devices酶标仪测A490 nm值。
1.3 FMD检测[9]
所有受试者于CAG前1日采用GE LOGIQ9彩色多普勒超声诊断仪检测肱动脉FMD，取仰卧位，采用7.5MHz探头于肘横纹上3～15 cm纵向探测，至少3个心动周期，获取肱动脉最大内径部位，静息状态下内肱动脉内径均数为基础内径（D0），于同一部位连续测量3次取均值；袖带加压后减压测量舒张期肱动脉内径（D1）。FMD=（D1-D0）/D0×100%。