B细胞血液肿瘤患者外周血CD40、CD154的表达及意义

谢治军 薛重重 杨丽萍 黄继贤 韦 湘 廖建军

粤北人民医院血液内科，广东韶关 512026

[摘要] 目的 分析B细胞血液肿瘤外周血淋巴细胞CD40、CD154表达率的特点。方法 28例B细胞血液肿瘤患者分为多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma，MM）17例，B细胞性非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）11例；选取30例健康体检人员作为对照组。应用流式细胞术检测B细胞血液肿瘤患者外周血淋巴细胞（Peripheral Blood Lymphocytes，PBL）CD40、CD154的表达率。结果①MM组：CD40表达率为（17.50±8.32）%，CD154表达率为（1.00±3.26）%；B-NHL组：CD40表达率为（29.84±15.61）%，CD154表达率为（2.01±0.59）%；对照组：CD40表达率为（6.48±3.34）%，CD154表达率为（3.25±1.04）%。②化疗后B-NHL患者外周血淋巴细胞CD40表达低于化疗前,P<0.05。③MM患者III期组PBLCD40表达率高于I～II期组,P<0.05。B-NHL患者PBL CD154表达率III～IV期低于I～II期组,P<0.05。 结论 ①MM患者、B-NHL患者均存在PBL CD40高表达，B-NHL患者同时存在PBL CD154低表达；CD40高表达提示MM预后差，CD154低表达与B-NHL预后有关。②化疗降低了B-NHL患者PBL CD40表达率。为临床上进行B细胞血液肿瘤诊断与治疗提供一定的依据。

教育期刊网 http://www.jyqkw.com
关键词 B细胞；血液肿瘤；CD40；CD154

[中图分类号] R732 [文献标识码] A [文章编号] 1674-074２（２０１4）08（b）－０009-03

大部分的B淋巴细胞血液肿瘤表达CD40分子，CD40、CD154与肿瘤细胞生物学意义非常复杂，国内外有关其与实体肿瘤和B细胞血液肿瘤的表达的研究众多，但结果不尽相同[1-2]。鉴于上述情况该课题将就这一问题进行探讨，初步了解CD40、CD154与B细胞血液肿瘤发生、发展的关系，为临床B细胞血液肿瘤患者治疗时机、方法及预后评估依据，以2011年7月—2013年3月的28例B淋巴血液肿瘤患者为研究对象，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

粤北人民医院血液内科收治的28例B淋巴细胞血液肿瘤患者，男18例，女10例，年龄39～81岁。28例B淋巴细胞血液肿瘤患者张之南主编《血液病诊断和疗效标准》[3]分两组：MM组17例，其中男11例，女6例，按照 Durie和Salmon分期标准分为I～II期8例，III期9例； B-NHL组11例，其中男7例，女4例，按照Ann/Arbor制定的分期标准，分为 I～II期4例，III～IV期 7例。 对照组为该院门诊体检健康人员，男19例，女11例，年龄25～67岁。

1.2 方法

1.2.1 主要仪器、试剂 FACS-Calibuer 流式细胞仪、红细胞裂解液（美国Becton -Dickinson (BD )公司）；ROCHE 7600 全自动生化分析仪（美国罗氏公司）；流式细胞荧光标记抗体CD45-PerCP、CD40-PE、CD145-PE，流式细胞荧光标记抗体阴性对照为IgG1-PE 和IgG1-FITC（美国Beckman公司）。

1.2.2 CD40、CD145检测 空腹8 h后外周静脉采血2 mL入EDTA抗凝管（安徽赫尔生物医学检验科技有限公司），混匀，EPICS-XL型流式细胞仪（Beckman-Coulter公司）进行CD40、CD154荧光抗体标记检测。检测鼠Ig G1阴性对照，并以阴性对照为对照标准检测CD40、CD154的百分比，分析数据并打印出二维散点图，以荧光抗体染色阳性的细胞百分数记录结果。

1.3 统计方法

使用spss17.0软件对数据进行统计与分析，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用独立样本t检验，计数资料比较采用配对t检验。

2 结果

2.1 B细胞血液肿瘤患者PBL CD40、CD154表达情况

MM组PBL CD40表达水平明显高于对照组（t=3.018,P<0.01），但其CD145 表达水平与对照组比较差异无统计学意义（t=0.803,P>0.05）；B-NHL组PBL CD40表达水平明显高于对照组（t=7.882,P<0.01），其CD145表达水平低于对照组（t=2.401,P<0.05）。见表1。

2.2 B细胞血液肿瘤患者化疗前后PBL CD40、CD154表达水平的变化

MM组有7例患者，B-NHL组 有5例患者进行化疗，化疗前后仅有B-NHL患者PBL CD40表达差异有统计学意义（t=2.997,P<0.05），化疗后表达水平低于化疗前，其余表达水平化疗前后无明显变化。见表2。

2.3 MM和B-NHL 患者PBL CD40、CD154表达水平在不同疾病分期的比较

MM患者PBL CD40表达率在I～II期组和III期组间差异有统计学意义，见表3。B-NHL患者PBL CD154表达率在I～II期组、III～IV期组比较差异有统计学意义，P<0.05，见表4。

3 讨论

国内外关于CD40及CD154在恶性肿瘤患者的临床研究已有报道，有文献[4-7]报告在卵巢癌、小细胞肺癌、胃癌和乳腺癌等多种肿瘤患者的外周血和肿瘤局部CD40表达率增加。该研究中B淋巴细胞血液肿瘤患者PBL CD40表达率高于健康人群，这与国内外研究数据基本一致[8-10]，另外，该研究还提示B-NHL患者同时存在PBL CD154低表达。

该研究中化疗后B-NHL患者PBL CD40表达率低于化疗后，B-NHL患者经化疗后PBL 淋巴细胞亚群中B淋巴细胞百分比下降，B-NHL组的PBL CD40表达率与B细胞百分比存在正相关性，故其化疗后PBLCD40表达率下降，但MM患者PBL CD40 化疗后表达率偏低，但与化疗前差异无统计学意义，这可能与MM患者所采用的化疗强度较低，而化疗后PBL 淋巴细胞亚群中B淋巴细胞百分比下降不明显有关。

该研究提示MM预后与临床分期密切相关，晚期的MM患者肿瘤负荷较高，外周血所含的骨髓瘤细胞较高，故CD40表达较高。B-NHL分期与CD154低表达有关，CD40-CD154结合可激活体内特异性免疫反应系统，参与机体的体液免疫和细胞免疫反应，而在CD154与CD40结合后，CD154的表达率升高， CD154联合IL-4、CpG可以高效促BCP-ALL细胞表面免疫分子的表达，从而有效提高机体T淋巴细胞细胞毒性效应从而产生抗肿瘤效应[11-12]。如上所述，CD154的低表达反应了CD154与CD40结合率较低，CD154与CD40结合率较低，导致机体的免疫缺陷，该研究中III～IV期组的B-ALL患者CD154表达率明显低于I～II期组。

综上所述， CD40高表达与MM预后有关， CD154低表达与B-NHL预后有关，CD40、CD154表达水平可以作为MM、B-NHL这两种B细胞血液肿瘤预后评估的有效指标之一。增加膜CD154效应的相关抗体有望在B细胞血液肿瘤治疗中取得成效，这为临床B细胞血液肿瘤患者临床综合治疗提供了参考。

教育期刊网 http://www.jyqkw.com
参考文献

[1] 张维红，于津浦，曹水，等．CD40 /CD40L 交联在CD4+T细胞诱导肿瘤细胞凋亡中的机制研究[J].中国免疫学杂志，2007，23(10):890-894.

[2] 刘占云,王艳煜, 俞娇,等.可溶性CD40 在部分B 细胞淋巴血液肿瘤患者中的表达及临床意义[J].诊断学理论与实践,2011,11(6):620-622.

[3] 张之南, 沈悌. 血液病诊断及疗效标准[M]. 3 版. 北京:北京科学出版社,2007:106-134.

[4] 蒋国勤，吴斌，刘燕．CD40 配基化对乳腺癌细胞株和血管内皮细胞的作用[J].中国癌症杂志，2005，15(5):435-437．

[5] 范开席，申洪明，孙小钧，等．CD40 在胃癌中的表达及其临床意义[J].肿瘤学杂志，2007，13(6):471-473．

[6] 卢旭东，朱晓兰，陈成，等． CD40 信号通过TNFRⅠ途径抑制肺癌细胞增殖的研究[J].癌症，2009，28(1):20-23．

[7] 穆传勇，陈成，庞雪芹.非小细胞肺癌组织和患者外周血中CD40 的表达及其临床意义[J].苏州大学学报:医学版,2012,32(6):841-844.

[8] Law CL, Grewal IS. Therapeutic interventions targetingCD40L (CD154) and CD40: the opportunities and challenges[J]. Adv Exp Med Biol,2009,647:8-36.

[9] 孙宏治，宫建，王巍,等.乳腺癌患者外周血CD40、CD40L的表达及意义[J].山东医药，2011，51（37）：73-74.

[10] 汪萍, 张冬青. B淋巴细胞刺激因子与多发性骨髓瘤的关联性分析[J]. 诊断学理论与实践,2009,8(4):449-452.

[11] Messmer D, Kipps TJ. CD154 gene therapy for human Bcell malignancies[J]. Ann N Y Acad sci,2005,1062:51-60.

[12] 沈维娜.Ｄ40、ＣＤ40Ｌ和sCD40在Ｂ细胞恶性血液肿瘤中的作用[J]. 上海交通大学学报,2010,30(10):1288-1290.

（收稿日期：2014-05-06）

·编读往来·

论文写作技巧——摘要

1. 摘要应着重反映研究中的创新内容和作者的独到观点；不要简单地重复题名中已有的信息。

2. 研究性文章摘要的内容应包括研究目的、研究方法、主要发现（包括关键性或主要的数据）和主要结论，一般应写成冠以“目的（Objective）”、“方法（Methods）”、“结果（Results）”和“结论（Conclusion）”小标题的结构式摘要。

3. 综述类文章摘要的内容应包括综述的主要目的、资料来源、综述时所选择的研究数目及这些研究是如何选择的、提炼数据的规则及这些规则是如何应用的、数据综合的最重要的结果和结论。可以写成结构式摘要，也可写成指示性或报道-指示性摘要。

4. 中文摘要一般使用第三人称撰写，不列图、表，不引用文献，不加评论和解释。

5. 摘要中首次出现的缩略语、代号等，除了公知公认者外，首次出现时须注明全称或加以说明。新术语或尚无合适汉语译名的术语，可使用原文或在译名后括号中注明原文。

6. 英文摘要一般与中文摘要内容相对应，但为了对外交流的需要，可以略详。

7. 中文摘要一般置于题名和作者姓名下方，英文摘要（含英文题名、汉语拼音作者姓名及工作单位）可置于中文摘要的下方。