天津地区番茄病毒病发生情况调查及其毒源ELISA检测

　　摘 要：对采自天津5个区县的255份番茄样品进行了双抗体夹心酶联免疫吸附测定（DAS-ELISA）检测。检测结果表明，在这255份样品中，至少217份感染了所检测病毒，其中，感染番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus， TYLCV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus， CMV）、烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus， TMV）、番茄花叶病毒（Tomato mosaic virus， ToMV）、蚕豆萎蔫病毒1、2号（Broad bean wilt virus 1、2， BBWV-1、2）、番茄斑萎病毒（TSWV）的样品分别为53.33%，53.33%，20.39%，14.12%，9.41%，0.39%。在检测呈阳性的217份样品中病毒单独侵染率为32.15%，复合侵染率为52.94%，这些数据表明在番茄上病毒复合侵染现象相当严重，其中受2种病毒复合侵染率高达40.39%，而受3种病毒复合侵染率达12.55%。

　　关键词：番茄病毒病；发病情况；ELISA 检测

　　中图分类号：S436.412 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2014.12.001

　　番茄是一种具有高经济价值、适于广泛栽培的作物，由于耕作栽培制度、品种变化等因素的影响，番茄的种植及病虫害防治中仍存在着许多问题，尤其是难于防治的病毒病。该病在我国南北种植区发生普遍，危害严重[1]。天津地区番茄病毒病的发生程度日趋严重，在一般年份其田间发病率均在25%以上，而病毒病流行年份部分地块发病率可达100%，番茄病毒病不仅造成夏秋季番茄种植面积严重下降，同时极大地降低了番茄产量和品质，已成为威胁夏秋季番茄生产的首要病害。目前国际上已报道的为害番茄的病毒达30余种[2]，我国先后检测出13种病毒[3-7]，以往研究明确了天津地区番茄病毒主要毒源种类为TMV（烟草花叶病毒）、CMV（黄瓜花叶病毒）和TYLCV（番茄黄花曲叶病毒）[7-8]。

　　为了解天津地区番茄上的病毒种类及其在番茄上的危害情况，为开展番茄病毒病的防治提供科学依据，笔者利用DAS-ELISA 技术对采自天津5个区县种植区的番茄病毒病样品，进行了针对6种茄果类蔬菜常见病毒的血清学检测，利用PCR技术扩增TYLCV番茄分离物CP蛋白基因，并进行了序列变异性分析。

　　1 材料和方法

　　1.1 样品采集

　　2013年4—12月在天津市武清、西青、静海、宁河、北辰5个区县蔬菜田调查发病情况，采集典型病毒病症状的番茄叶片、嫩梢或茎秆样品，取样时对所采集的番茄样品进行统一编号、照相、症状记载，将所采集的植物样品分别装入标记自封袋（20 cm×25 cm）中，放入-20 ℃的冰箱中冷冻保存备用。

　　1.2 准备样品

　　样品采用石英砂、研钵进行研磨，研磨后将得到的汁液用提取缓冲液1∶10稀释，4 000 r·min-1离心5 min，取上清液备用。

　　1.3 标准抗原及抗体

　　番茄TYLCV、CMV、TMV、ToMV、BBWV-1、BBWV-2、TSWV的酶免疫试剂盒购自AC diagnostics公司，包含标准抗原和碱性磷酸酶标记的兔多克隆抗体。

　　1.4 计算结果

　　采用酶联免疫检测仪ELx800测定405 nm的光吸收值（OD），记录检测结果。阳性判断标准（P/N）：（检测样品OD405/阴性对照OD405） ≥2.00为阳性。