老鹳草膏对佐剂性关节炎大鼠血清VEGF和TGF-β1表达的影响

　　摘要：为观察老鹳草（ＧｅｒａｎｉｕｍｗｉｌｆｏｒｄｉｉＭａｘｉｍ）膏对佐剂性关节炎（ＡＡ）大鼠模型血清细胞因子ＶＥＧＦ、ＴＧＦ－β１含量的影响，探讨老鹳草对类风湿性关节炎的作用机理，试验将ＳＤ大鼠尾根部皮内注射完全弗氏佐剂（ＣＦＡ）造模，将造模成功的ＡＡ大鼠随机分为３组，于第１０天开始分别以生理盐水（模型对照组）、老鹳草膏（老鹳草膏组）和ＭＴＸ（ＭＴＸ组）处理各试验组，同时设置空白对照组。第４５天乙醚麻醉后眼底采血、ＥＬＩＳＡ法检测血清中ＶＥＧＦ、ＴＧＦ－β１的浓度。结果表明，与模型对照组和ＭＴＸ组相比，老鹳草膏可显著降低ＡＡ大鼠血清异常升高的ＶＥＧＦ水平，提高血清ＴＧＦ－β１含量。表明老鹳草可改善大鼠足关节状态，具有免疫调节功能，有助于机体恢复免疫稳定状态。

　　关键词：佐剂性关节炎；老鹳草（ＧｅｒａｎｉｕｍｗｉｌｆｏｒｄｉｉＭａｘｉｍ）膏；细胞因子；甲氨蝶呤

　　类风湿性关节炎（Ｒｈｅｕｍａｔｉｏｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）为一种慢性自身免疫性疾病，因能引起关节功能障碍而严重影响人类健康，目前已建立多种ＲＡ动物模型进行科研试验，其中应用广泛且较成熟的动物模型是胶原诱导性关节炎（Cｏｌｌａｇｅｎｉｎｄｕｃｅｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＣＩＡ）和佐剂性关节炎（Aｄｊｕｖａｎｔａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＡＡ）。有文献报道两种模型在临床表现、实验室指标和病理机制上都与人临床ＲＡ相似或相近，是研究ＲＡ、筛选抗炎免疫药物较理想的动物模型［１，２］。

　　本试验利用完全弗氏佐剂构建了ＡＡ大鼠模型，并通过关节肿胀度及血清细胞因子ＶＥＧＦ、ＴＧＦ－β１的变化对比观察分析了老鹳草（ＧｅｒａｎｉｕｍｗｉｌｆｏｒｄｉｉＭａｘｉｍ）膏和甲氨喋呤（ＭＴＸ）干预下模型大鼠上述指标的变化。

　　１材料与方法

　　１．１试验动物

　　ＳＤ大鼠６０只，雌３６只，雄２４只，体重（２５０±２３）ｇ，购自济南实验动物饲养所，适应性喂养一周后进行试验。

　　１．２药物与试剂

　　ＶＥＧＦ试剂盒、ＴＧＦ－β１试剂盒，均为美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司生产；完全弗氏佐剂，美国ｓｉｇｍａ公司生产；ＭＴＸ，购于潍坊市人民医院，使用前用生理盐水（ＮＳ）配制为０．０２５ｍｇ／ｍＬ悬浊液。

　　老鹳草，６月下旬采自潍坊安丘，除去根部及杂质，洗净晾干切段备用。

　　１．３方法

　　１．３．１老鹳草膏的制作老鹳草磨碎后６０目标准筛分样，以黄原胶和蜂蜜作为增稠剂，反复搅拌为膏状，４℃冰箱保存备用。

　　１．３．２动物模型的制作与分组ＳＤ大鼠６０只随机取１０只作为空白对照，其余５０只为模型组，制作佐剂性关节炎模型，方法是完全弗氏佐剂（ＣＦＡ）充分振荡摇匀后，取０．１ｍＬ于大鼠尾根部皮内注射，每天观测关节肿胀度，第１０天测量后取符合模型条件的４２只随机分为３组，每组１４只，分别为模型对照组、老鹳草膏组和ＭＴＸ组，分别以生理盐水、老鹳草膏和ＭＴＸ处理各组。具体处理方法是：老鹳草膏组大鼠后肢关节处涂抹老鹳草膏，每天早晚各１次；ＭＴＸ组按０．０２５ｍｇ（１ｍＬ）／只灌胃，每周１次；模型对照组ＮＳ灌胃（１ｍＬ／只）；空白对照组尾根部皮内注射０．１ｍＬＮＳ。每周１次，连续给药５周（３５ｄ）。

　　１．３．３关节肿胀度的观测用螺旋千分尺测量大鼠双后肢足垫厚度并计算关节肿胀度。各试验组分别于注射药物前（０ｄ）及注射后１、３、５、7、１０、１６、３０、４５ｄ测量。关节肿胀度计算公式如下：

　　关节肿胀度＝

　　■×１００％

　　１．３．４老鹳草膏对ＡＡ大鼠血清中细胞因子的影响第４５天测量后乙醚麻醉大鼠并眼底采血，２ｍＬ／只，用ＥＬＩＳＡ法（按照ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书操作）检测血清中细胞因子ＶＥＧＦ、ＴＧＦ－β１的浓度。

　　１．３．５统计学处理试验数据均以ｘ±ｓ表示；结果用ＳＰＳＳ１３１０统计软件进行分析。关节肿胀度采用多个独立样本非参数检验方法进行统计；细胞因子浓度采用单向方差分析法进行统计，两组间比较采用ｔ检验。

　　２结果

　　２．１ＡＡ大鼠模型关节肿胀度观测结果

　　大鼠致炎后３～４ｈ出现症状，１５ｈ足肿胀达高峰，表现为早期的炎症反应，持续２～３ｄ逐渐减轻，７～８ｄ后再度肿胀，且进行性加重。大鼠行动不便，体重下降，易激惹，其表现类似人类ＲＡ，因大鼠后足肿胀程度远高于前足，测量时以后足为基准。

　　由表１可见，造模第１０天大鼠后足平均厚度与空白对照组相比差异极显著（Ｐ＜０．０１），空白对照组大鼠未见明显反应。４２只大鼠符合模型制备标准，制模成功率８４％。