菟丝子提取物促进大鼠精子生成的研究
2022-06-09
中药菟丝子为旋花科菟丝子（CuscutachinensisLam.）的干燥成熟种子，在临床上应用广泛，被《神农本草经》列为上品，具滋补肝肾、益精明目、固精缩尿、止泻安胎等功效[1]，单独或配伍使用治疗少弱精子所致的男性不育症效果显著[2-3]，但其机理尚未完全明了。本实验建造大鼠生精障碍模型，研究菟丝子提取物对大鼠精子生成的影响，报道如下。
1材料与方法
1.1试剂与仪器
氯化钾、果糖、磷酸二氢钾、苦味酸等，AR级，均为国产。
醋酸棉酚（Gossypolacetate）：国产，纯度99.9%（HPLC法）；菟丝子药材购自中药饮片有限公司，符合《中国药典》规定。
Olympus光学显微镜：日本OlympusOpticalCo.Ltd生产。
1.2实验动物
Wistar雄性大鼠40只，清洁级，体质量130～150g。
1.3实验方法
1.3.1实验药剂的制备
称取菟丝子50g，加8倍量蒸馏水浸泡30min，煮沸，再煎30min，过滤，滤渣再加8倍量蒸馏水同上处理2次，合并3次滤液，70℃浓缩，制成1.0g生药/mL，4℃冷藏备用。
实验中使用的精子营养液等参照有关文献配制。
1.3.2生精障碍大鼠模型的建造与给药
Wistar雄性大鼠适应性饲养2天后随机分为正常对照组（10只）和建造模型组（30只）。
以醋酸棉酚按50mg/kg体质量灌胃，隔日一次，连续2周，建造大鼠生精障碍模型。
将30只生精障碍模型大鼠再随机分为模型组、菟丝子低剂量组与高剂量组，每组10只。实验组按5.0g、10.0g生药/kg体质量，用菟丝子提取物灌胃；正常对照组、模型组给以10.0g/kg体质量的生理盐水灌胃；每日一次，连续3周。
1.3.3实验大鼠的处理及检测
各组大鼠于末次给药2h后立即处死，取出睾丸、附睾，剔除脂肪和结缔组织，吸干血液、组织液，称重。取附睾尾部，释出精子，观察其活力情况并计数；同时做精子爬高试验，记录精子30分钟的爬高距离，考察精子的质量。
2结果与分析
实验表明：模型组的精子数量显著低于正常对照组和菟丝子实验各组，有非常显著性差异（P<0.01）；模型组精子30分钟爬高距离显著低于正常对照组和菟丝子实验组，差异有显著性（P<0.01，P<0.05）；模型组的精子指数与正常对照组、菟丝子实验组比较，有非常显著性差异（P<0.01），而菟丝子低剂量组与高剂量组的实验结果虽有差异，但差异无显著性（P>0.05）。实验表明模型组大鼠睾丸的生精能力最差，而经菟丝子提取物治疗后，生精功能明显增强，在一定范围内，呈剂量依赖关系。
精子活力观察：在精子计数之前在显微镜下观察精子的活力，模型组精子活力很差，a级精子很少，绝大多数精子原地缓慢移动；而正常对照组、菟丝子不同剂型组的精子活力明显优于模型组，精子活跃，多数直线运动，a级精子明显增多。结果表明，与模型组比较，实验组的精子数量和质量均有显著改变，详见下表。
3讨论
棉酚的雄性抗生育作用是肯定的，机理是其能抑制精子的发生[4]。本实验模型组的精子数量、质量与正常对照组比较，均有显著性差异（P<0.01），表明实验建造的大鼠生精障碍模型成功。
睾丸与附睾的重量、精子的数量是睾丸生精功能的直接反映，本实验精子计数结果：模型组大鼠的精子数量最少，显著低于菟丝子给药实验组，有非常显著性差异（P<0.01），说明大鼠生精障碍大鼠经各菟丝子给药组治疗后，睾丸的生精功能明显改善。
精子活力是精子质量的重要参数，本实验结果模型组的精子较少，活动情况很差，大多数精子仅有缓慢的蠕动。而菟丝子给药实验组的精子数量明显多于模型组，活力也明显优于模型组，大多数精子非常活跃地运动，a、b级精子显著增多。本实验结果与类似的实验研究结果基本一致[5]。
精子爬高试验是直接评价精子活力（质量）的有效方法[6]。实验表明：正常对照组和菟丝子给药实验各组精子30分钟爬高均高于模型组，与模型组比较有显著性差异（P<0.01），菟丝子给药组之间无显著差异，说明菟丝子均可显著提高实验大鼠精子的数量和质量。
本实验结果表明菟丝子提取物对实验性生精障碍大鼠治疗后的性器官、精子质量与数量均有显著性的提高，实验结果也为菟丝子治疗少弱精子的男性不育症提供了科学的依据。关于菟丝子L对雄性生殖系统的作用，本课题组将继续进行研究。
参考文献：
[1]林慧彬，彭广芳，李为玲.中药菟丝子的本草考证[J].时珍国药研究，1997，8（3）：193-194.
[2]周洪，张雪亭.菟丝子汤治疗精子畸形症105例疗效观察[J].吉林中医药，1992，（5）：10.
[3]王建国，张会臣.菟丝子汤治疗肾虚型男性不育症19例[J].河北中医，2001，23（1）：53.
[4]薛社普，梁德才，刘裕.男用节育药棉酚的实验研究[M].北京：人民卫生出版社，1983，2-66.
[5]任献青，丁樱，崔瑞琴.菟丝子黄酮干预雷公藤多苷所致雄性幼鼠睾丸组织损伤的实验研究[J].中国中西医结合儿科杂志，2010，2（4）：302-305.
[6]方奉谁.精子爬高实验在常规检验中的地位[J].广西医学，1991，13（6）：393-395.
基金项目：
浙江省教育厅科研项目（20071242）资助课题。
1材料与方法
1.1试剂与仪器
氯化钾、果糖、磷酸二氢钾、苦味酸等，AR级，均为国产。
醋酸棉酚（Gossypolacetate）：国产，纯度99.9%（HPLC法）；菟丝子药材购自中药饮片有限公司，符合《中国药典》规定。
Olympus光学显微镜：日本OlympusOpticalCo.Ltd生产。
1.2实验动物
Wistar雄性大鼠40只，清洁级，体质量130～150g。
1.3实验方法
1.3.1实验药剂的制备
称取菟丝子50g，加8倍量蒸馏水浸泡30min，煮沸，再煎30min，过滤，滤渣再加8倍量蒸馏水同上处理2次，合并3次滤液，70℃浓缩，制成1.0g生药/mL，4℃冷藏备用。
实验中使用的精子营养液等参照有关文献配制。
1.3.2生精障碍大鼠模型的建造与给药
Wistar雄性大鼠适应性饲养2天后随机分为正常对照组（10只）和建造模型组（30只）。
以醋酸棉酚按50mg/kg体质量灌胃，隔日一次，连续2周，建造大鼠生精障碍模型。
将30只生精障碍模型大鼠再随机分为模型组、菟丝子低剂量组与高剂量组，每组10只。实验组按5.0g、10.0g生药/kg体质量，用菟丝子提取物灌胃；正常对照组、模型组给以10.0g/kg体质量的生理盐水灌胃；每日一次，连续3周。
1.3.3实验大鼠的处理及检测
各组大鼠于末次给药2h后立即处死，取出睾丸、附睾，剔除脂肪和结缔组织，吸干血液、组织液，称重。取附睾尾部，释出精子，观察其活力情况并计数；同时做精子爬高试验，记录精子30分钟的爬高距离，考察精子的质量。
2结果与分析
实验表明：模型组的精子数量显著低于正常对照组和菟丝子实验各组，有非常显著性差异（P<0.01）；模型组精子30分钟爬高距离显著低于正常对照组和菟丝子实验组，差异有显著性（P<0.01，P<0.05）；模型组的精子指数与正常对照组、菟丝子实验组比较，有非常显著性差异（P<0.01），而菟丝子低剂量组与高剂量组的实验结果虽有差异，但差异无显著性（P>0.05）。实验表明模型组大鼠睾丸的生精能力最差，而经菟丝子提取物治疗后，生精功能明显增强，在一定范围内，呈剂量依赖关系。
精子活力观察：在精子计数之前在显微镜下观察精子的活力，模型组精子活力很差，a级精子很少，绝大多数精子原地缓慢移动；而正常对照组、菟丝子不同剂型组的精子活力明显优于模型组，精子活跃，多数直线运动，a级精子明显增多。结果表明，与模型组比较，实验组的精子数量和质量均有显著改变，详见下表。
3讨论
棉酚的雄性抗生育作用是肯定的，机理是其能抑制精子的发生[4]。本实验模型组的精子数量、质量与正常对照组比较，均有显著性差异（P<0.01），表明实验建造的大鼠生精障碍模型成功。
睾丸与附睾的重量、精子的数量是睾丸生精功能的直接反映，本实验精子计数结果：模型组大鼠的精子数量最少，显著低于菟丝子给药实验组，有非常显著性差异（P<0.01），说明大鼠生精障碍大鼠经各菟丝子给药组治疗后，睾丸的生精功能明显改善。
精子活力是精子质量的重要参数，本实验结果模型组的精子较少，活动情况很差，大多数精子仅有缓慢的蠕动。而菟丝子给药实验组的精子数量明显多于模型组，活力也明显优于模型组，大多数精子非常活跃地运动，a、b级精子显著增多。本实验结果与类似的实验研究结果基本一致[5]。
精子爬高试验是直接评价精子活力（质量）的有效方法[6]。实验表明：正常对照组和菟丝子给药实验各组精子30分钟爬高均高于模型组，与模型组比较有显著性差异（P<0.01），菟丝子给药组之间无显著差异，说明菟丝子均可显著提高实验大鼠精子的数量和质量。
本实验结果表明菟丝子提取物对实验性生精障碍大鼠治疗后的性器官、精子质量与数量均有显著性的提高，实验结果也为菟丝子治疗少弱精子的男性不育症提供了科学的依据。关于菟丝子L对雄性生殖系统的作用，本课题组将继续进行研究。
参考文献：
[1]林慧彬，彭广芳，李为玲.中药菟丝子的本草考证[J].时珍国药研究，1997，8（3）：193-194.
[2]周洪，张雪亭.菟丝子汤治疗精子畸形症105例疗效观察[J].吉林中医药，1992，（5）：10.
[3]王建国，张会臣.菟丝子汤治疗肾虚型男性不育症19例[J].河北中医，2001，23（1）：53.
[4]薛社普，梁德才，刘裕.男用节育药棉酚的实验研究[M].北京：人民卫生出版社，1983，2-66.
[5]任献青，丁樱，崔瑞琴.菟丝子黄酮干预雷公藤多苷所致雄性幼鼠睾丸组织损伤的实验研究[J].中国中西医结合儿科杂志，2010，2（4）：302-305.
[6]方奉谁.精子爬高实验在常规检验中的地位[J].广西医学，1991，13（6）：393-395.
基金项目：
浙江省教育厅科研项目（20071242）资助课题。