通络胶囊治疗骨性关节炎的药效学研究

　　通络胶囊主要用于治疗骨性关节炎。为研究通络胶囊治疗骨性关节炎的药效学机制,笔者参照国家食品药品监督管理局颁布的《天然药物临床前一般药理学研究技术指导原则》采用动物模型对通络胶囊进行了与治疗骨性关节炎相关的药效学研究,现报告如下。

　　1材料

　　实验药物通络胶囊自制(鲁药制字Z20080014);抗骨增生丸由北京宝树堂科技药业有限公司生产;伊文斯蓝等试剂均为分析纯,由上海试剂一厂生产。

　　实验动物Wistar大鼠,体重200g±20g;昆明种小鼠,体重20±2g。以上动物均由山东鲁抗医药股份有限公司动物中心提供,清洁级动物,普通饲料喂养,动物室温度25±2℃,许可证号SCXK(鲁)20050017。

　　主要仪器热板测痛仪,型号GJ-8402,由浙江宁海白石电子医药仪器厂生产;光学显微镜,型号XSZ-H,重庆光学仪器厂生产;紫外-可见分光光度计,型号TU-1810,由北京普析通用试验仪器公司出品;恒温三用水浴箱,型号HH.W21.600B,北京长风仪器表公司生产。

　　2方法与结果

　　2.1活血化瘀试验

　　参照文献方法[1]取昆明种小鼠,雌雄各半,随机分为5组(n=10)通络胶囊高、中、低剂量组(每日剂量8.8g、4.4g、2.2g生药/kg),抗骨增生丸阳性对照组(每日剂量4.6g生药/kg)阴性对照组(等容积生理盐水)。灌胃给药,每日1次,连续给药3日。测试当日,给药30min后,用1%戊巴比妥钠溶液0.05ml/10g腹腔麻醉。除去耳廓背侧的细毛,并将小鼠腹部向下固定在显微镜的载物台上,使鼠耳固定,调节显微镜(放大倍数为10×10),直至可以清楚地观察小鼠耳廓微揗环情况。固定视野,调节测微尺的位置,使其可以测量血管直径的变化。给药后35min时,观察小鼠耳廓选定部位的微小动、静脉的管径,此测定值为造模前基础值(A、V);选择血液流态相似的微小静脉,用于观察造模后血液流态的改变。给药后40min时,除阴性照组给予同体积生理盐水。分别在造模后10、20、30min时,观察小鼠耳部选定的同一位置,记录微动、静脉管径及血液流态的变化。以各组动物造模前与造模后的微动、静脉管径的差值(△A、△V)为观察指标,同时对微静脉血液的流态进行评分,并作为比较指标。微静脉血液的流态评分标准见表1。对小鼠耳廓微揗环的影响试验结果见表2,通络胶囊对静脉注射葡聚糖溶液引起的小鼠微揗环障碍有显著的改善作用,表明通络胶囊具有明显的活血化瘀作用。

　　2.2镇痛试验

　　参照文献方法[2]取昆明种小鼠,雌雄各半,随机分为5组(n=10)通络胶囊高、中、低剂量组(每日剂量8.8g、4.4g、2.2g生药/kg),抗骨增生丸阳性对照组(每日剂量4.6g生药/kg)阴性对照组(等容积生理盐水)。灌胃给药,每日1次,连续给药3日。测试当日给药1h后,腹腔注射0.7%醋酸溶液0.1mg/kg,5min后,开始记录此后30min内各鼠的扭体次数(次/30min)及首次扭体反应潜伏期(s)。扭体次数以腹部收缩、躯体扭曲、后肢伸展、蠕行等为判断标准,并按下式计算镇痛百分率=(阴性对照组平均扭体次数-用药组平均扭体次数)/阴性对照组平均扭体次数×100%。对扭体法致小鼠疼痛的影响试验结果见表3,通络胶囊高、中、低剂量组和抗骨增生丸阳性对照组小鼠疼痛扭体反应次数明显低于阴性对照组,差异有显著性(P<0.05);通络胶囊高、中剂量组扭体反应次数亦低于抗骨增生丸阳性对照组,差异无显著性(P>0.05)镇痛百分率较抗骨增生丸升高,3组分别为58.96%、47.80%、45.92%;通络胶囊高、中低剂量组和抗骨增生丸阳性对照组小鼠首次扭体反应潜伏期较阴性对照组明显延长,差异均有显著性(P<0.05),表明通络胶囊具有明显的镇痛作用。

　　2.3抗炎试验

　　2.3.1对透明质酸酶致大鼠足跖肿胀的影响

　　参照文献方法[3],取Wistar大鼠,雌雄各半,按足跖大小及大鼠性别随机分为5组(n=10),通络胶囊高、中、低剂量组(每日剂量(6.4g、3.2g、1.6g生药/kg),抗骨增生丸阳生对照组(每日剂量3.3g生药/kg),阴性对照组(等容积生理盐水)。灌胃给药,每日1次,连续给药5日。试验给致炎剂前一天,用毛细管放大法测定各鼠正常足跖体积。末次给药后1h,每鼠右后足跖皮下注射500u/ml的透明质酸酶0.1ml/只,用上法测定致炎后0.5、1、2、3h时的足跖体积,以致炎后足跖体积与致炎前足跖体积的差值为足跖肿胀度指标。结果见表4,通络胶囊可使透明质酸酶致大鼠足跖肿胀度显著减轻(p<0.05),作用优于抗骨增生丸,表明通络胶囊对急性炎症有抑制作用。

　　2.3.2对大鼠棉球肉芽肿的影响

　　参照文献方法[4]。取雄性Wistar大鼠随机分为5组(n=10)通络胶囊高、中、低剂量组(每日6剂量6.4g、3.2g、1.6g生药/kg)抗骨增生丸阳性对照组(每日剂量3.3g生药/kg),阴性对照组(等容积生理盐水)。腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg麻醉,在每只鼠的左右两侧腋窝部用碘酊消毒,75%酒精脱碘后各切1cm长小口,用眼科镊子将两个20mg高压灭菌棉球(已用青霉素和链霉素混合液0.2ml浸泡,并60℃低温烘干)从切口处植入两侧腋窝部皮下,随即缝合皮肤(全过程无菌操作)于手术前一天开始灌胃给药,每日1次,连续给药7日,第8日切开原切口,将棉球连同周围结缔组织一并取出,剔除脂及组织,70℃烘干后称重,将棉球和肉芽肿总重量减去棉球原重量即得肉芽肿干重。计算对大鼠棉球肉芽肿的抑制率:抑制率=[(生理盐水组肉芽肿重量-实验组肉芽肿重量)/生理盐水组肉芽肿重量]×100%。结果见表5,通络胶囊能明显抑制大鼠棉球肉芽肿的形成(p<0.01),表明通络胶囊有抑制慢性炎症的作用。

　　3讨论

　　本试验研究采用活血化瘀试验、镇痛试验、抗炎试验,对通络胶囊的主要药理作用进行了试验研究。试验结果表明,通络胶囊对静脉注射葡聚糖致小鼠耳廓微循环障碍型有显著改善作用;对扭体法致小鼠疼痛模型,可显著提高小鼠的痛阈值;对透明质酸酶致大鼠足跖肿胀急性炎症模型、大鼠棉球肉芽肿慢性炎症模型,均有显著抗炎作用。结果证明,通络胶囊有活血化瘀、消肿镇痛、抗炎作用。

　　参考文献

　　[1]徐淑云,等,药理试验方法学[M].第三版.北京:人民卫生出版社,2003:1119-1122.

　　[2]徐淑云,等,药理试验方法学[M].第三版.北京:人民卫生出版社,2003:882-883.

　　[3]徐淑云,等,药理试验方法学[M].第三版.北京:人民卫生出版社,2003:911-914.

　　[4]徐淑云,等,药理试验方法学[M].第三版.北京:人民卫生出版社,2003:917-919.